微生物遗传育种课件基因重组与育种.pptVIP

过滤性因子是噬菌体（phage）的证明：过滤性因子不会因DNase处理而失去活性，说明它不是裸露在溶液中的DNA，故可以排除转化作用，另外由于两个菌是隔离培养的因而也可以排除接合作用；过滤性因子与从溶源性菌分离到的噬菌体P22具有相同大小的质量；用抗P22的血清或加热处理，使P22的感染性和过滤性因子的功能失活的速率相同；抗P22的沙门氏菌菌株同时也对过滤性因子表现为抗性。因此可以证明：过滤性因子就是温和型噬菌体P22。第61页，共104页，星期日，2025年，2月5日三、普遍性转导（generalizedtransduction）通过完全缺陷的phage对供体菌任何DNA小片段的“误包”，而实现其遗传性状传递至受体菌的转导现象，称为普遍性转导。第62页，共104页，星期日，2025年，2月5日第63页，共104页，星期日，2025年，2月5日第64页，共104页，星期日，2025年，2月5日（一）完全普遍转导噬菌体在进行包装时，有极少数phage（10－6～10－8）的衣壳将与头部DNA相仿的一小段供体DNA片段误包在内，形成完全不含phage自身DNA的假噬菌体，这种假噬菌体称为完全缺陷噬菌体。由完全缺陷噬菌体介导的普遍性转导称为完全普遍转导。第65页，共104页，星期日，2025年，2月5日（二）流产普遍转导简称流产转导（abortivetransduction）。经转导而获得了供体菌DNA片段的受体菌，如果其外源DNA在体内既不进行交换、整合、复制，也不迅速消失，而进行转录、转译及性状表达，这种现象称为流产转导。流产转导的受体菌可以在选择性培养基上形成微小的菌落。第66页，共104页，星期日，2025年，2月5日四、局限性转导（specializedtransduction）指通过部分缺陷的温和噬菌体把供体菌的少数特定基因携带到受体菌中，并获得表达的转导现象。特点：1、只能是个别特定基因；2、该特定基因由部分缺陷噬菌体携带；3、缺陷噬菌体是由于在其形成过程中所发生的低频率“误切”或由于双重溶源菌的裂解而形成。第67页，共104页，星期日，2025年，2月5日第68页，共104页，星期日，2025年，2月5日局限转导第69页，共104页，星期日，2025年，2月5日第70页，共104页，星期日，2025年，2月5日（一）低频转导（LFT，lowfrequencytransduction）由于宿主染色体上进行不正常的切离的频率极低，因此在裂解物中所含的部分缺陷phage的比例也极低。这种裂解物称为LFT裂解物。LFT裂解物在低m.o.i.情况下感染宿主，可获得极少量的局限转导，这就是低频转导。m.o.i.：称作感染复数，是指每一个敏感细胞所能吸附的相应phage的数量。第71页，共104页，星期日，2025年，2月5日（二）高频转导（HFT，highfrequencytransduction）双重溶源菌：在高m.o.i.情况下，受体菌会同时吸附缺陷型phage和完整phage，并且可以同时整合在受体菌的核染色体组上，这时的受体菌称为双重溶源菌。此时，正常的phage称为助体phage。由双重溶源菌形成的裂解物称为HFT裂解物。高频转导：用低m.o.i.的HFT裂解物去感染受体细胞，则可高频率的发生局限转导，这就是高频转导。第72页，共104页，星期日，2025年，2月5日五、转导用于基因定位普遍性转导噬菌体通常可以用于绘制供体菌遗传图谱。应用于基因定位的共转导现象：P1噬菌体的基因组约为染色体长度的2.4％，P1噬菌体感染E.coli后可以随意包裹寄主DNA片段，只要这个片段包含的基因座位不超过E.coli遗传图谱的两分钟距离，均可一起被转导，这是一般用接合和转化作用来进行基因定位所难以实现的，对细菌染色体小片段的精细结构十分有用。两个邻近的基因一起被转导的现象称为共转导（co－transduction)。第73页，共104页，星期日，2025年，2月5日（六）中断杂交实验原理：如果人为地中断正在基因转移的杂交对，然后测定受体菌里遗传标记重组频率，就能知道基因连锁情况。第29页，共104页，星期日，2025年，2月5日1957年，E.L.Wollman和F.Jocob设计