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结直肠癌中NGX6基因双转录本表达与临床病理特征的关联性探究

一、引言

1.1研究背景与意义

结直肠癌（ColorectalCancer,CRC）作为常见的恶性肿瘤之一，在全球范围内严重威胁人类健康。近年来，其发病率和死亡率呈上升趋势，据相关统计数据显示，CRC在癌症相关死亡原因中位居前列。在中国，随着人口老龄化加剧、生活方式改变以及饮食结构西方化，结直肠癌的发病率也逐年攀升，给社会和家庭带来了沉重的经济负担和心理压力。早期结直肠癌症状隐匿，缺乏特异性表现，多数患者确诊时已处于中晚期，错失了最佳治疗时机，5年生存率较低。而晚期结直肠癌患者常面临肿瘤复发、转移及对现有治疗手段耐药等问题，治疗效果不佳。因此，深入研究结直肠癌的发病机制，寻找有效的早期诊断标志物和治疗靶点，对于改善患者预后、降低死亡率具有重要意义。

NGX6（NasopharyngealCarcinoma-associatedgene6）基因是中南大学肿瘤研究所分子遗传室采用定位候选克隆策略克隆的一个候选抑瘤基因，位于染色体9q31.2区域，主要调节胃肠道细胞的生长、分化和凋亡等生理过程。前期研究检测了NGX6所有转录本的表达，结果显示NGX6在结直肠癌中存在着表达下调，尤其是在伴有淋巴结转移及远处转移的结直肠癌样本中NGX6表达明显下调或缺失，提示NGX6基因的表达下调或缺失可能与结直肠癌的发生、发展及转移相关。进一步研究发现其抑瘤机制主要是通过负调控EGFR介导的相关通路，下调cyclinE和cyclinD1表达，上调CKI家族成员P27的表达，延缓细胞周期G1-S的进程，从而抑制癌组织的增殖。

但随着研究的深入，研究者发现NGX6mRNA经不同的剪接方式可以产生三个转录本，命名为NGX6-1、NGX6-2和NGX6-3。其中NGX6-1与NGX6-2编码区相同，二者翻译同一种472个氨基酸的蛋白质，因此将其合并称为NGX6-L；NGX6-3翻译一种338个氨基酸的蛋白质，将其称为NGX6-S。然而，目前关于这两种转录本NGX6-L和NGX6-S在结直肠癌中的具体表达情况及功能尚不明确。对它们的深入研究，有望揭示NGX6基因抑制结直肠癌增殖及侵袭转移的分子机制，为结直肠癌的早期诊断和治疗提供新的方向和思路，具有重要的理论意义和临床应用价值。

1.2研究目的与创新点

本研究旨在前期对NGX6基因整体研究的基础上，深入探讨NGX6基因两个转录本NGX6-L和NGX6-S在结直肠癌组织及配对正常组织中的表达情况，通过原位杂交等技术，精准检测其表达水平。并运用统计学方法，全面分析这两个转录本的表达与结直肠癌患者临床病理特征，如肿瘤的部位、大小、分化程度、淋巴结转移及远处转移情况、Dukes分期等之间的相关性，鉴定在结直肠癌发生发展过程中NGX6两转录本各自所起的作用，为明确NGX6基因抑制结直肠癌增殖及侵袭转移的分子机制研究提供新的、更具针对性的实验依据。

同时，本研究的创新之处在于首次针对NGX6基因的两个特定转录本在结直肠癌中的表达及与临床病理特征的关系展开系统研究。过往对NGX6基因的研究多集中于其整体表达及功能，对不同转录本的差异化研究较少。本研究深入到转录本层面，有望发现两个转录本在结直肠癌发生发展中独特的生物学功能和作用机制，为结直肠癌的分子诊断和靶向治疗提供新的潜在标志物和治疗靶点。此外，本研究还将收集大量临床病例资料进行分析，结合临床实际情况，探讨转录本表达与临床病理特征的联系，使研究成果更具临床应用价值，能更好地指导临床实践。

1.3研究方法与技术路线

本研究采用了多种实验方法与技术，从样本收集到结果分析，每个环节都经过精心设计与严格实施，以确保研究的科学性和可靠性，技术路线见图1-1。

首先是样本收集，本研究收集100例结直肠癌手术患者的癌组织及配对正常组织标本蜡块，这些标本均来自[具体医院名称]，收集时间为[具体时间段]。手术切除的标本迅速放入液氮中速冻，随后转移至-80℃冰箱保存，以保证组织的完整性和RNA的稳定性。标本采集过程严格遵循医学伦理规范，所有患者均签署了知情同意书。

采用原位杂交的方法检测两个转录本在不同分期结直肠癌组织及配对正常组织中的表达情况。原位杂交是一种在组织细胞原位进行核酸分子杂交的技术，能在保持细胞形态结构的基础上，准确检测特定核酸序列的存在与分布。针对NGX6-L和NGX6-S转录本的特异性核苷酸序列，设计并合成相应的地高辛标记的寡核苷酸探针，用于后续的原位杂交实验。对结直肠