基因诊断与基因治疗课件.pptVIP

基因診斷與基因治療GeneticDiagnosisandGeneTherapy基因變異致病類型內源基因的變異基因結構突變基因表達異常外源基因的入侵第一節基因診斷概念和特點基因診斷的常用技術方法基因診斷的應用一、基因診斷的概念和特點概念利用現代分子生物學和分子遺傳學的技術方法，直接檢測基因結構及其表達水準是否正常，從而對疾病作出診斷的方法。特點針對性強特異性高靈敏度高適用性強，診斷範圍廣二、基因診斷的常用技術方法核酸分子雜交技術1.限制性內切酶酶譜分析法2.DNA限制性片段長度多態性（restrictionfragmentlengthpolymorphism，RFLP）分析3.等位基因特異寡核苷酸探針（allelespecificoligonucleotide，ASO）雜交法聚合酶鏈反應（PCR）基因測序基因晶片（一）核酸分子雜交技術來源不同、具有互補堿基序列的核酸（DNA或RNA）單鏈在適宜條件下互補配對形成雜化雙鏈結構。選用已知順序片段作為探針，經放射性同位素或非放射性物質標記後，再與未知的目的核酸鏈進行雜交反應。分離已雜交和未雜交的標記核酸片段，通過標記信號的檢測對未知的目的核酸鏈進行定性、定量分析。×MstⅡ酶切位點(GCTNAGG)5′3′正常基因5′3′突變基因1.15kb1.35kb鐮狀紅細胞貧血患者基因組的限制性酶切分析+﹣0.2kb1.15kb1.35kb正常人突變攜帶著患者鐮狀紅細胞貧血患者基因組的限制性酶切分析RLFP分析法3.等位基因特異寡核苷酸探針(allelespecificoligonucleotide,ASO)雜交法當基因的突變部位和性質已完全明瞭時，可以合成ASO用同位素或非同位素標記進行診斷。探針通常為長20bp左右的核苷酸。用於探測點突變時一般需要合成兩種探針，一種是野生型探針，與無突變序列互補雜交，但不能與突變基因序列雜交；另一種是突變型探針，只與突變基因序列穩定雜交，這樣，就可以把只有一個堿基發生了突變的基因區別開來.ASO雜交法ATACGTGC正常ASO突變ASO基因型: +/+ +/- -/-雜交: ++++ ++ 基因型: +/+ +/- -/-雜交: ++ ++++（二）聚合酶鏈反應（PCR）

直接採用PCR技術進行基因診斷；常與其它技術如分子雜交、限制酶酶譜分析、單鏈構象多態性檢測、限制性片段長度多態性分析、DNA序列測定等聯合應用。PCR-RFLPPCR-SSCPPCR/單鏈構象多態性分析(singlestrandconformationpolymorphism,SSCP)PCR產物變性後，經聚丙烯醯胺凝膠電泳，正常基因和變異基因的遷移位置不同，借此可分析確定致病基因的存在。正常人純合突變雜合突變Leber病患者PCR/SSCP分析+﹣（三）基因測序

基因測序是進行基因突變檢測的最直接、最準確的方法；可確定突變的部位和性質；由於技術原因，目前尚難以直接在臨床上應用。DNA診斷：以DNA為檢測對象，探測DNA序列中的突變情況；RNA診斷：以mRNA為檢測對象的診斷方法；常用的有RNA點雜交、Northern分析和定量逆轉錄PCR等。（四）基因晶片

近年來興起的基因分析與檢測的新技術，具有快速、敏感、高效、平行化、自動化等優點，將發展成新一代基因診斷技術；可檢測基因的結構及其突變、多態性，分析基因的表達情況；按照基因晶片的用途將其分為表達譜晶片、診斷晶片、指紋圖譜晶片、測序晶片、毒理晶片等。三、基因診斷的應用遺傳疾病腫瘤感染性疾病，傳染性流行病判斷個體疾病易感性器官移植組織配型法醫學中個體識別、親子鑒定第二節基因治療概念和方法基因治療的基本程式基因治療的應用與展望定義早期是指用正常的基因整合入細胞基因組，以校正和置換致病基因的一種治療方法。目前廣義上來講是指將某種遺傳物質轉移到患者細胞內，使其在體內發揮作用，以達到治療疾病目的的方法。一、基因治療的概念************************************************************