第四章愈伤组织培养.pptVIP

（1）胚状体：高等植物的体细胞在一定条件下所诱导形成的胚，称为体细胞胚，即所谓的胚状体。二、体细胞胚胎的形成1.体细胞胚胎发生的几个概念（2）胚状体形成的5个阶段：

原胚期、球形胚期、心形胚期、鱼雷形胚和子叶期。第31页，共40页，星期日，2025年，2月5日第1页，共40页，星期日，2025年，2月5日愈伤组织概念：组织培养中，利用特定的条件，促使原已分化并具有一定功能的植物细胞脱离原来的发展轨道，失去原有的状态和功能而成为能进行活跃分裂的一团细胞，称为愈伤组织。愈伤组织的相关概念愈伤组织培养：将母体植株上的各个部分切下作为外值体，接种到无菌的培养基上，进行愈伤组织诱导、生长和发育的一门技术。第2页，共40页，星期日，2025年，2月5日第一节愈伤组织的诱导郁李的愈伤组织第3页，共40页，星期日，2025年，2月5日再分化：愈伤组织在一定的培养条件下又可以经过胚胎发生形成双极性的胚状体，或经过器官发生形成单极性的芽或根，进而重新形成完整的植株，这后一段过程一般称为再分化。脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。细胞的全能性的体现第4页，共40页，星期日，2025年，2月5日一、愈伤组织形成的条件外植体（explant)培养条件(conditionofculture)诱导愈伤组织的成败关键主要不是实验材料，而是培养条件，其中激素的成分和浓度是最重要的因素。第5页，共40页，星期日，2025年，2月5日1、外植体的选择一般情况下：双子叶植物比单子叶和裸子植物容易幼年细胞和组织比成年的容易二倍体细胞比单倍体细胞容易同一种植物不同基因型诱导愈伤组织的能力也不相同（24个水稻抗稻瘟病单基因鉴别品系悬浮细胞系的建立，14.3%~97.1%,周晓罡等，西南农业学报，2008年03期）第6页，共40页，星期日，2025年，2月5日2、培养条件生长素：2,4-D、NAA、IAA等细胞分裂素：6-BA、KT、ZT等第7页，共40页，星期日，2025年，2月5日二、愈伤组织的形成过程(王凯基等1981）图3-2油橄榄愈伤组织形成过程中各期细胞形态和RNA含量变化第8页，共40页，星期日，2025年，2月5日（一）诱导期（起动期）诱导期又称起动期，指细胞准备进行分裂的时期，是愈伤组织形成的起点。第9页，共40页，星期日，2025年，2月5日CallusarisingfromleaftissueCallusarisingfromvasculartissueFromrootFromembryoculture第10页，共40页，星期日，2025年，2月5日Photoindicatingwherethecallus(c)arisesfrom第11页，共40页，星期日，2025年，2月5日外植体细胞在完整植株中随着细胞的分化过程而逐渐停止分裂，开始执行它们各自不同的功能。外植体细胞一般处于静止状态，称为静止细胞。第12页，共40页，星期日，2025年，2月5日1、特点①细胞的气体交换迅速增加。②多聚核糖体不断增加：截止M期前，每个细胞中的RNA含量增加到300％；③蛋白质发生周期性的积累：每个分裂细胞的总增加量约为200％；④?酶活力也发生一定的变化：DNA聚合酶活力增加、与代谢有关的酶类，如己糖激酶和一些脱氢酶的活力也增加。⑤细胞的大小基本没有变化。第13页，共40页，星期日，2025年，2月5日2、诱导期的长短内部：植物的种类、生理状况外部：光照、外源激素因素决定。最常用的有2，4－D、NAA、IAA和细胞分裂素等。组织的机械损伤也作为一种刺激因素诱导细胞开始分裂，愈伤组织往往出现在伤口处。有些天然提取物对愈伤组织的诱导和维持十分有益，常用的有椰子汁（10％），0.5％的酵母提取物，5％～10％的番茄汁。Yeoman和Mitchell(1970)指出了核仁是生长物质的作用部位。改善第14页，共40页，星期日，2025年，2月5日（二）分裂期（Celldivision）外植体(explant)中已分化的活细胞在外源激素的作用下，外植体外层细胞出现了分裂，由于外层细胞的迅速分裂使得这些细胞的体积缩小，逐渐回复到分生组织状态，因此也称为回复变化。第15页，共40页，星期日，2025年，2月5日1、分裂期细胞的特征①外层细胞进行分裂，而中间的细胞不分裂。细胞的数目迅速增加。胡萝卜组织培养7d后，细胞数可增加10倍。②?每个细胞平均鲜重下降。③?细胞体积小，内无液泡