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SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳法SDS:十二烷基硫酸鈉，變性劑普通蛋白質電泳的泳動速率取決於荷質比（淨電荷、大小、形狀）用SDS和巰基乙醇（打開二硫鍵）處理蛋白質變性（肽鏈伸展）並與SDS結合，形成SDS-蛋白質複合物不同蛋白質分子的均帶負電（SDS帶負電）；且荷質比相同（蛋白質分子大，結合SDS多；分子小，結合SDS少）不同蛋白質分子具有相似的構象用幾種標準蛋白質相對分子品質的對數值對它們的遷移率作圖測出待測樣品的遷移率從標準曲線上查出樣品的相對分子品質電泳電泳電泳migration優點：快速，樣品用量少，可同時測幾個樣品缺點：誤差大，約為±10％（誤差主要來源於遷移距離的測量誤差）此方法只能測得亞基肽鏈的相對分子品質蛋白質相對分子量最低分子量法：若某一蛋白質中某一特定成分含量為x%，且該組分只有一份，則最低分子量=原子量（分子量）?100/x?蛋白質或多肽鏈中aa殘基的平均分子量為110,用蛋白質分子量除以110，可粗略估計出其aa殘基數，在解題時常常遇到這一常數。（2）蛋白質的兩性電離及等電點蛋白質的等電點(isoelectricpoint,pI)調節溶液的pH，使蛋白質所帶的正、負電荷相等，即成為兼性離子，淨電荷為零，在電場中既不向陽極移動，也不向陰極移動，此時溶液的pH稱為蛋白質的等電點。電泳：帶電顆粒在電場中移動的現象。分子大小不同的蛋白質所帶淨電荷密度不同，遷移率即異，在電泳時可以分開。1.自由介面電泳：蛋白質溶於緩衝液中進行電泳。2.區帶電泳：將蛋白質溶液點在浸了緩衝液的支持物上進行電泳，不同組分形成帶狀區域。（1）紙上電泳：用濾紙作支持物。電泳（2）凝膠電泳：用凝膠（澱粉、瓊脂糖、聚丙烯醯胺）作支持物。1）圓盤電泳：玻璃管中進行的凝膠電泳。+—2）平板電泳：鋪有凝膠的玻板上進行的電泳。-+等電聚焦電泳：當蛋白質在其等電點時，淨電荷為零，在電場中不再移動。++－－－－+－－－－－5.06.07.0穩定pH梯度5.06.07.0穩定pH梯度通電++－－－－+－－－－－++－－－－+－－－－－++－－－－+－－－－－++－－－－+－－－－－5）無規捲曲或自由回轉(randomcoil)◆指無規律的鬆散肽鏈結構◆在一般球蛋白分子中，往往含有大量的無規則捲曲，它使蛋白質肽鏈從整體上形成球狀構象。◆沒有一定規律的鬆散肽鏈結構。常常是酶的活性部位。（3）超二級結構和結構域超二級結構(super-secondarystructures):是指若干相鄰的二級結構中的構象單元彼此相互作用，形成有規則的，在空間上能辨認的二級結構組合體。是蛋白質二級結構至三級結構層次的一種過渡態構象層次。超二級結構的基本類型：??、??、???、??????X?????????超二級結構的基本類型：模體在許多蛋白質分子中，可發現二個或三個具有二級結構的肽段，在空間上相互接近，形成一個特殊的空間構象，被稱為模體(motif)。鈣結合蛋白中結合鈣離子的模體鋅指結構結構域(domain)◆是球狀蛋白質的折疊單位。多肽鏈在超二級結構的基礎上進一步繞曲折疊成緊密的近似球形的結構，具有部分生物功能。◆對於較大的蛋白質分子或亞基，多肽鏈往往由兩個以上結構域締合而成三級結構。◆類型：α-螺旋域；β-折疊域；α+β域；α/β域；無規則捲曲+β-回折域；無規則捲曲+α-螺旋結構域等（4）蛋白質的三級結構多肽鏈在二級結構、超二級結構和結構域的基礎上，主鏈構象和側鏈構象相互作用，沿三維空間多方向捲曲，進一步盤曲折疊形成特定的球狀分子結構。是多肽鏈上的所有原子（包括主鏈和側鏈）在三維空間的分佈。疏水鍵、離子鍵、氫鍵和VanderWaals力等。主要的化學鍵：三級結構的特徵

?含多種二級結構單元，如α螺旋、β折疊等；?有明顯的折疊層次；?是緊密的球狀或橢球狀實體；?分子表面有一空穴(活性部位)；?疏水側鏈埋藏在分子內部，?親水側鏈暴露在分子表面。?主要由疏水作用力維持實例：肌紅蛋白抹香鯨肌紅蛋白（Myoglobin）的三級結構肌紅蛋白的結構與功能

（1）功能：哺乳動物肌肉中儲存氧並運輸氧的蛋