第四章肠道菌群的.pptVIP

倾注培养根据标准要求或对污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。将凉至46℃结晶紫中性红胆盐琼脂培养基（VRBA平板）注入平皿约15～20mL，并转动平皿，混合均匀。同时将1mL稀释液（不含样品）作空白对照。待琼脂凝固后，倒入3～4mLVRBA培养基铺面，培养基凝固后翻转平板，置36±1℃温箱内培养18～24h。第28页，共48页，星期日，2025年，2月5日平板菌落数的选择选取菌落数在15～150之间的平板，分别计数典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径约为0.5mm。第29页，共48页，星期日，2025年，2月5日?从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，36?℃±1?℃培养24?h～48?h，观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。??证实试验第30页，共48页，星期日，2025年，2月5日大肠菌群平板计数的报告??经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g（mL）样品中大肠菌群数。例：10-4样品稀释液1?mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×104/g（mL）=6.0×105?CFU/g（mL）。第31页，共48页，星期日，2025年，2月5日第32页，共48页，星期日，2025年，2月5日其他方法

大肠菌群PetrifilmTM测试纸片法第33页，共48页，星期日，2025年，2月5日第34页，共48页，星期日，2025年，2月5日第1页，共48页，星期日，2025年，2月5日一大群居住在人和动物肠道中生物学性状近似的革兰阴性杆菌属于肠杆菌科多数是肠道的正常菌群，至少有30个菌属，120个以上的菌种少数为致病菌，是胃肠传染病的最重要病原菌肠道杆菌(entericbacilli)第2页，共48页，星期日，2025年，2月5日乳糖发酵试验共同特性1、相似的形态染色2、简单的培养条件3、活泼的生化反应重要试验初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌肠道致病菌肠道非致病菌多数不发酵乳糖多数发酵乳糖第3页，共48页，星期日，2025年，2月5日5、抵抗力不强6、易变异溶源性转换生化反应性变异通过引起耐药性变异毒力性变异转导接合4、抗原构造复杂?第4页，共48页，星期日，2025年，2月5日肠道杆菌生物特征1．形态与结构：中小等大小两端钝圆的革兰氏阴性杆菌，无芽胞，多数有鞭毛，大多有菌毛，少数有荚膜或包膜。2．培养特性：需氧或兼性厌氧菌，在普通培养基和麦康凯培养基上生长良好，为中等大小的光滑型菌落。有些菌在血琼平板上出现β型溶血，在液体培养中呈均匀混浊生长。3．生化反应：发酵葡萄糖，氧化酶阴性。生化反应活泼，一般说来，生化反应的强弱与其致病作用成反比。第5页，共48页，星期日，2025年，2月5日肠道杆菌流行病学抵抗力：不强，加热60℃经30分钟即死亡。不耐干燥,胆盐、煌绿等对大肠杆菌等非致病菌有选择性作用，可制备肠道杆菌选择性培养基以分离肠道致病菌。对一般化学消毒剂如漂白粉,酚,甲醛均敏感,对低温有耐受力.临床意义:肠杆菌科细菌可致化脓性疾病,肺炎,脑膜炎,败血症以及伤口,泌尿道和肠道的感染,本科细菌占临床分离细菌总数的50%和临床分离的革兰氏阴性菌总数的80%,将近50%的败血症,70%以上的泌尿道感染是由肠杆科细菌引起.传播方式：污染的饮水及食物、经消化道传播。第6页，共48页，星期日，2025年，2月5日肠杆菌科中与卫生医学有关的细菌第7页，共48页，星期日，2025年，2月5日第8页，共48页，星期日，2025年，2月5日大肠菌群为革兰氏阴性菌第9页，共48页，星期日，2025年，2月5日一、大肠菌群检验第一法大肠菌群MPN法第二法大肠菌群平板计数快速法大肠菌群PetrifilmTM测试纸片法第10页，共48页，星期日，2025年，2月5日MPN最大或然数（mostprobablenumber，MPN）计数又称稀释培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。本法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素