秋水仙素诱导秋海棠多倍体植株技术规程.docxVIP

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AHAASS

团体标准

T/AHAASS017—2025

秋水仙素诱导秋海棠多倍体植株技术规程

TechnicalcodeforpolyploidplantsinducedbycolchicineinBegoniagrandisDryand

2025-07-21发布2025-08-01实施

安徽省农学会发布

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T/AHAASS017—2025

秋水仙素诱导秋海棠多倍体植株技术规程

1范围

本文件规定了秋水仙素诱导秋海棠多倍体植株的组培设施和要求、愈伤组织培养、秋水仙素诱导处理、芽分化培养、壮苗培养、生根培养、炼苗和移栽管理、多倍体植株筛选与鉴定、多倍体植株留存、档案记录。

本文件适用于秋水仙素诱导秋海棠愈伤组织进行化学诱变产生多倍体植株。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB5084农田灌溉水质标准

JB/T10594日光温室和塑料大棚结构与性能要求

LY/T1770桉树无性系组培快繁技术规程

LY/T1882林木组织培养育苗技术规程

LY/T2234林业机械林业工厂化育苗育苗穴盘

NY/T496肥料合理使用准则通则

NY/T2118蔬菜育苗基质

NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程

3组培设施和要求

3.1组培室

包括准备室、储藏室、洗涤室、培养基配制室、灭菌室、接种室、培养室、检测室等。

3.2温室

玻璃温室（大棚或联栋）或日光温室的结构与性能应符合JB/T10594的规定。要求设施坚固，抗灾能力强，具备环境调控能力，能够调节温度、湿度、光照以及防虫防雨等。

3.3设备

可按照NY/T2306的规定配备设备。至少应配备超净工作台、接种器具消毒器、高压蒸汽灭菌锅等灭菌设备和光照培养箱、恒温摇床等培养设备，流式细胞仪、显微镜等实验设备。

3.4灌溉水

水质要求应符合GB5084。

3.5空气环境

空气洁净度需达到万级净化（ISO5级）以上，防止污染。需定期换气，保持通风，避免二氧化碳浓度过高影响培养效果。

3.6肥料

肥料使用应符合NY/T496的规定。

4愈伤组织培养

4.1培养基配制

T/AHAASS017—2025

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4.1.1基本培养基配制

选择MS基本培养基，其组分及含量参见附录A，表A.1。

4.1.2诱导培养基配制

诱导培养基配制参见附录A，表A.2。其中MS、6-BA、NAA等母液配制参照NY/T2306执行。另外，培养基中添加25g/L蔗糖和7g/L琼脂，调整pH=5.8。

4.2培养基消毒

培养基消毒和存放按照LY/T1770和LY/T1882相关条款执行。

4.3外植体选择

从栽种4个月左右的一代实生苗中，选取健康无病虫害的植株，剪取刚展开的嫩叶作为外植体。

4.4外植体消毒

4.4.1先用0.1%的洗衣粉液洗涤后，再用蒸馏水清洗干净，放置于超净工作台上进行消毒处理。

4.4.2具体消毒操作步骤是：先用无菌水清洗1遍，然后倒入含有1滴tween-20的有效氯浓度为5%-6%的消毒液（如84消毒液）消毒8min，倒掉消毒液，用无菌水漂洗5次～8次，直至澄清无异味备用。

4.5外植体接种与培养

在超净工作台上将消毒、灭菌好的外植体叶片切成约1cm2大小，叶正面朝上，接种到配制好的培养基上，培养25d左右长出愈伤组织。

4.6培养条件

保持培养室温度（24±2）℃,光照强度2000Lx～3000Lx，空气湿度70%，每天光照16h，黑暗8h。

5秋水仙素诱导处理

5.1秋水仙素溶液配置

称取0.05g秋水仙素，用蒸馏水溶解，并定容至100mL。

5.2秋水仙素溶液除菌

使用滤膜孔径0.22μm的过滤器过滤除菌备用。

5.3秋水仙素废液处理

秋水仙素（剧毒）使用操作及废液处理应遵守安全操作规范，在通风橱中进行，并配戴防护装备，废液采用10%硫代硫酸钠中和处理。

5.4秋水仙素溶液浸泡方法与时间

在超净工作台内将愈伤组织接入已除菌的秋水仙素溶液中浸泡，避光、置于24±2℃恒温摇床每分钟70转