放射性配体与受体结合分析实验RBA方法.ppt

2）曲线的高度取决于[RT]。在曲线起始段，曲线上升的快慢即曲线的斜率取决于配基与受体的亲和力，所以，KD越小(亲和力越大)，饱和曲线上升越快，KD越大(亲和力越小)，饱和曲线上升越慢。（即：亲和力越大，受体与配件结合速度越快，时间越短）k1,v1[R]+[L]－－－－[RL]k2,v2KD＝K2/K1=[R][L]/[RL]第30页，共64页，星期日，2025年，2月5日饱和曲线的形状和KD有关（如图1）。图1KD对饱和曲线的影响第31页，共64页，星期日，2025年，2月5日饱和曲线曲线的高度取决于[RT]（如图2）。图2[RT]对饱和曲线影响第32页，共64页，星期日，2025年，2月5日质量作用定律(Massactionlaw)：受体和配基的结合反应服从可逆反应的质量作用定律，可用下式表示:k1,v1[R]+[L]－－－－[RL]（1）k2,v2上式中，[R]和[L]为游离受体和游离配基的浓度，[RL]为复合物浓度，v1和v2为结合速率和解离速率，k1和k2为结合速率常数(associationrateconstant)和解离速率常数(dissociationrateconstant)。数学表达第33页，共64页，星期日，2025年，2月5日根据质量作用定律：v1=k1[R][L]；v2=k2[RL]当反应达到平衡后，v1=v2,即:k1[R][L]=k2[RL],则平衡解离常数（KD）的数学表达式为：KD＝K2/K1=[R][L]/[RL]（2）第34页，共64页，星期日，2025年，2月5日Scatchard作图

设[LT]为配体的初始浓度，[RT]为受体的初始浓度（即受体总量），则有：[L]=[LT]–[RL][R]=[RT]–[RL]由式（2）整理可得：KD＝[RT-RL][L][RL]将上式整理可得：[RL]=[RT]－1_×[RL]（Scatchard方程）[L]KDKD变形：[RL]为受体与配基特异结合的量，换成[B]表示，[L]为自由配基的量，换成[F]表示，[RT]为受体总量，也即受体最大结合量，换成[Bmax]表示，则上式方程变为 B/F=Bmax/KD-B/KD（[RT]为受体总量，等于[R]和[RL]之和，也是最大结合量Bmax）以复合物浓度[RL]为横坐标，以复合物浓度和游离配体的浓度比值[RL]/[L]为纵坐标作图，即为Scatchard作图。第35页，共64页，星期日，2025年，2月5日图3简单单位点系统RBA的Scatchard作图简单单位点系统Scatchard作图为一条直线，斜率为-（1/KD），横轴截距为[RT]，纵轴截距为[RT]/KD（见图3）。由此求得KD与Bmax第36页，共64页，星期日，2025年，2月5日Hill方程与作图当一个受体分子可以结合一个以上的配基时，配基受体结合反应不是简单的双分子反应，而是k1,v1[R]+n[L]－－－－n[RL]，根据质量作用定律推导出Hill方程：k2,v2经过变形得其中n为hill系数，以结合分数B/Bmax对游离配基[L]作图，得Hill作图（如右）。（3）第37页，共64页，星期日，2025年，2月5日将（3）式两边取对数第38页，共64页，星期日，2025年，2月5日非特异性结合

(non-specificbinding，NSB