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elisa测抗原实验报告范文

ModelreportofantigentestbyELISA

(实验报告)

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日期：____________________

编号：YB-BH-054143

工作报告|WorkReport

实验报告

elisa测抗原实验报告范文

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一．实验目的

酶联免疫吸附测定（enzyme-linkedimmunosorbentassay简称ELISA）是

在免疫酶技术（immunoenzymatictechniques）的基础上发展起来的一种新型

的免疫测定技术,ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加

待测抗体（抗原）,再加相应酶标记抗体（抗原）,生成抗原（抗体）－－待测抗

体（抗原）－－酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助

分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。待测抗体（抗原）的定量与有色产

生成正比。

二．实验原理

用于免疫酶技术的酶有很多，如过氧化物酶，碱性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳

糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰胆碱酯酶，6－磷酸葡萄糖脱氧酶等。

常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧

化物酶为多。由于酶摧化的是氧化还原反应，在呈色后须立刻测定，否则空气中

的氧化作用使颜色加深，无法准确地定量。

辣根过氧化物酶（HRP）是一种糖蛋白，每个分子含有一个氯化血红素

（protonhemin）区作辅基。酶的浓度和纯度常以辅基的含量表示。氯化血红素

辅基的最大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm，所以酶的浓

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工作报告|WorkReport

实验报告

度和纯度计算式是（已知HRP的A（1cm403nm1%）＝25，式中1％指HRP

百分浓度为100ml含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶浓度以mg/ml计算是HRP

的A（1cm403nmmg/ml=2.5）HRP纯度（RZ）=A403nm/A275nm纯度RZ（Ｒ

einheitZahl）值越大说明酶内所含杂质越少。高纯度HRP的RZ值在3.0左右，

最高可达3.4。用于ELISA检测的HRP的RZ值要求在3.0以上。

ELISA的基本原理有三条：

（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙

烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；

（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍

能保持其免疫学和酶学活性；

（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判

定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量

成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。

ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所

引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原

和小分子抗原的定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、特

异、简单、快速、稳定及