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2025/07/14

免疫沉淀试验原理、技术与应用

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CONTENTS

目录

01

免疫沉淀试验原理

02

免疫沉淀技术细节

03

免疫沉淀的应用领域

04

免疫沉淀技术的挑战与展望

免疫沉淀试验原理

01

基本概念

抗原-抗体特异性结合

免疫沉淀依赖于抗原与抗体之间的高度特异性结合，形成抗原-抗体复合物。

免疫复合物的形成

在免疫沉淀中，抗原与抗体结合后形成免疫复合物，这是后续分离和分析的基础。

沉淀剂的作用

使用特定的沉淀剂（如蛋白A/G）来促进免疫复合物的沉淀，以便于后续的分离和检测。

洗涤步骤的重要性

洗涤步骤用于去除未结合的杂质和非特异性结合的蛋白质，确保实验结果的准确性。

抗体与抗原的相互作用

特异性结合

抗体通过其可变区域与特定抗原的表位进行特异性结合，形成抗原-抗体复合物。

亲和力与亲合力

抗体与抗原的结合强度由亲和力和亲合力决定，影响免疫沉淀的效率和特异性。

沉淀形成机制

抗原-抗体特异性结合

抗原与相应的抗体结合形成复合物，是沉淀形成的基础。

交联作用

多价抗体与多个抗原结合，形成交联结构，促进沉淀的形成。

沉淀剂的作用

加入沉淀剂如PEG或硫酸铵，通过改变溶液的离子强度或介电常数，促进复合物沉淀。

免疫沉淀技术细节

02

试验材料与设备

抗体的选择与制备

选择特异性高的抗体是免疫沉淀成功的关键，常用的方法包括单克隆和多克隆抗体。

离心机和超速离心管

离心是免疫沉淀中分离抗原-抗体复合物的重要步骤，超速离心管能承受高速离心的力。

试验步骤与条件

样品制备

将细胞或组织样本裂解，释放出目标蛋白，为免疫沉淀做准备。

抗体孵育

将特定抗体与样品混合，使抗体与目标蛋白特异性结合形成免疫复合物。

分离复合物

通过蛋白质A/G珠子或其他方法分离出抗体-蛋白复合物，准备后续分析。

结果分析与验证

样本准备

收集细胞或组织样本，裂解细胞提取总蛋白，为免疫沉淀做准备。

抗体孵育

将特定抗体与样本混合，确保充分孵育以形成抗原-抗体复合物。

沉淀与洗涤

通过添加蛋白质A/G珠子等沉淀剂，结合抗原-抗体复合物，随后进行洗涤以去除非特异性结合物。

免疫沉淀的应用领域

03

生物医学研究

特异性结合

抗体通过其可变区域与特定抗原的表位特异性结合，形成抗原-抗体复合物。

亲和力与亲合力

抗体与抗原的结合强度由亲和力决定，亲合力则描述了多个抗体与抗原结合的总效果。

疾病诊断与治疗

抗体的选择与准备

选择特异性高的抗体是免疫沉淀成功的关键，需确保抗体与目标蛋白特异性结合。

离心机和超速离心管

离心机用于分离免疫复合物，超速离心管则能承受高速旋转产生的强大离心力。

蛋白质组学研究

抗原-抗体特异性结合

免疫沉淀中，特定的抗原与抗体结合形成复合物，导致沉淀的形成。

交联作用

抗体分子能够与多个抗原分子结合，形成大分子复合物，促进沉淀。

离心分离

通过离心力作用，将形成的免疫复合物从溶液中分离出来，形成可见的沉淀。

药物开发与筛选

抗体的选择与制备

选择特异性高的抗体是免疫沉淀成功的关键，常用的方法包括多克隆和单克隆抗体。

离心机和超速离心管

离心是免疫沉淀中分离抗原-抗体复合物的重要步骤，超速离心管能承受高速旋转产生的巨大离心力。

免疫沉淀技术的挑战与展望

04

技术局限性

特异性结合

抗体通过其可变区域与特定抗原的表位进行特异性结合，形成抗原-抗体复合物。

亲和力与亲合力

抗体与抗原的结合强度由亲和力和亲合力决定，影响免疫沉淀试验的敏感性和特异性。

新型技术的融合

抗原-抗体特异性结合

免疫沉淀试验利用抗原与抗体的特异性结合，形成抗原-抗体复合物。

免疫复合物的形成

在特定条件下，抗原与抗体结合后形成免疫复合物，是实验的基础。

沉淀剂的作用

加入沉淀剂如蛋白A琼脂糖，促使免疫复合物沉淀，便于后续分析。

洗涤步骤的重要性

洗涤步骤去除未结合的杂质，确保实验结果的特异性和准确性。

未来发展趋势

01

样本准备

收集细胞或组织样本，裂解细胞提取蛋白，确保样本中目标蛋白的完整性和活性。

02

抗体孵育

将特定抗体与样本混合，使抗体特异性结合目标蛋白，形成抗原-抗体复合物。

03

沉淀与洗涤

通过添加蛋白质A/G珠子等沉淀剂，结合抗原-抗体复合物，然后进行洗涤以去除非特异性结合物。

THEEND

谢谢