肠炎沙门氏菌亚单位抗原DNA疫苗：构建、表达及免疫学特性深度剖析.docxVIP

肠炎沙门氏菌亚单位抗原DNA疫苗：构建、表达及免疫学特性深度剖析

一、引言

1.1肠炎沙门氏菌的危害及研究背景

肠炎沙门氏菌（Salmonellaenteritidis）作为一种常见且危害广泛的革兰氏阴性杆菌，在人畜健康领域投下了浓重的阴影。它不仅是食源性疾病的主要病原菌之一，还凭借其“人畜共患病原体”的特性，在人类与动物之间肆意传播，引发了一系列不容忽视的健康问题。

在人类世界中，肠炎沙门氏菌的感染途径多样，主要通过摄入被污染的食物或水而侵入人体。一旦成功入侵，它便会迅速在人体内兴风作浪，引发多种严重疾病。其中，最为常见的当属急性胃肠炎。患者往往会突然出现发热、腹痛、腹泻、恶心、呕吐等一系列症状，这些症状不仅给患者带来了身体上的极大痛苦，还可能导致脱水、电解质紊乱等严重并发症，对患者的生命健康构成直接威胁。在一些免疫力低下的人群中，肠炎沙门氏菌还可能进一步侵入血液，引发败血症，甚至引发脑膜炎、骨髓炎等更为严重的全身性感染疾病，这些疾病的致死率和致残率都相对较高，给患者及其家庭带来了沉重的负担。

肠炎沙门氏菌在动物养殖领域同样造成了巨大的损失。在家禽养殖中，它可导致鸡、鸭、鹅等家禽出现腹泻、消瘦、产蛋量下降等问题，严重影响家禽的生长发育和生产性能。在养猪业中，感染肠炎沙门氏菌的猪可能会出现腹泻、生长迟缓、饲料利用率降低等情况，增加养殖成本，降低养殖效益。而且，动物感染肠炎沙门氏菌后，还可能成为潜在的传染源，将病菌传播给其他动物和人类，进一步加剧疫情的扩散。

传统的防治方法，如药物治疗，虽然在一定程度上能够缓解症状，但也带来了诸多问题。抗生素的滥用导致细菌耐药性不断增强，使得治疗效果越来越差，同时还可能破坏动物肠道内的微生物平衡，引发其他健康问题。而卫生管理措施虽然能够在一定程度上减少病菌的传播，但无法从根本上杜绝感染的发生。因此，开发一种安全、有效的疫苗成为了防治肠炎沙门氏菌的关键。疫苗能够通过激发机体的免疫系统，使其产生特异性的免疫应答，从而达到预防和控制感染的目的。与传统防治方法相比，疫苗具有预防效果好、副作用小、可持续性强等优点，是未来防治肠炎沙门氏菌的重要发展方向。

1.2DNA疫苗的优势与发展现状

DNA疫苗，作为疫苗发展历程中的重要创新，又被称为“裸”DNA疫苗、基因疫苗、核酸疫苗或多核苷酸疫苗，被视为继灭活疫苗、弱毒疫苗以及亚单位疫苗之后的“第三代疫苗”。其原理是将编码某种蛋白质抗原的重组真核表达载体直接注入动物体内，使外源基因在活体内表达，产生的抗原激活机体的免疫系统，从而诱导特异性的体液免疫和细胞免疫应答。与传统疫苗相比，DNA疫苗展现出诸多显著优势。

从生产角度来看，DNA疫苗的生产成本较低且适于批量生产。其接种载体，如质粒，结构相对简单，提纯质粒DNA的工艺也较为简便。这与传统蛋白质抗原需要复杂的纯化方法不同，不同的DNA构件具有稳定的物理和化学性质，可以通过单一程序进行纯化，大大降低了生产的难度和成本，为大规模生产提供了便利。在储存和运输方面，DNA疫苗具有良好的稳定性。它可以干粉的形式保存数年，且仍然保持活性，在使用时，只需在盐溶液中即可恢复原有活性。这种特性使得DNA疫苗在储存和运输过程中无需特殊的条件，即使在偏远地区或基础设施薄弱的地方，也能够方便地进行储存和分发，有效解决了传统疫苗在储存和运输上的难题。

安全性上，DNA疫苗也具有突出的表现。它不像活减毒疫苗那样存在潜在的毒性转化风险，也不会出现灭活细胞疫苗常见的副作用。由于DNA疫苗编码的仅是单一的一段病毒基因，基本没有毒性逆转的可能，避免了减毒疫苗毒力回升的危险。而且，机体免疫系统中DNA疫苗的抗原相关表位比较稳定，也不存在像弱毒疫苗或亚单位疫苗那样表位丢失的问题。DNA疫苗还具备高度的灵活性。其结构可以通过分子技术轻松操作，能够根据需要特异性表达感兴趣的抗原，或者将编码多种抗原的基因整合到质粒中，从而提供针对多种疾病的免疫保护。比如，可将嵌合细胞因子基因引入抗原质粒中作为佐剂，实现共表达并增强免疫反应。DNA疫苗还能诱导广泛的免疫反应，不仅包括体液免疫，涉及抗体的产生，还涵盖细胞免疫，涉及T细胞的参与。对于一些需要强效细胞免疫反应的疾病，如抗肿瘤免疫，以及对抗病毒感染，诱导细胞免疫至关重要，而DNA疫苗在这方面表现出了独特的优势。

DNA疫苗的研究始于1983年，当时EnzoPaoletti和DennisPanicali设计策略，利用遗传工程改造普通天花疫苗，尝试使之用于预防其他疾病。1993年，JeffreyUlmer及其同事展示了直接向小鼠注射包含流感抗原的质粒DNA，小鼠随后对该病毒感染表现出保护性免疫反应，这一成果为DNA疫苗的发展奠定