人体外周血淋巴细胞染色体制备与观察实验方案 .pdfVIP

实验方案

实验外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备，染色体组型分析

一、实验目的

1、了解动物细胞培养的方法。掌握人体外周血淋巴细胞培养与染色体标本制备。

2、初步掌握人类染色体G－带的显示方法及人类染色体G－带在染色体识别中的意义。

3、熟悉人类染色体的镜下检查和核型分析方法。初步掌握人类染色体G带的特征及其

识别。

二、实验原理

所谓外周血培养即是将外周血接种在适当的培培养物中加入适量的秋水仙素，使纺锤体

微管解聚，这样细胞停留在中期，可以获得大量的分裂细胞。用低渗盐溶液（一般是

0.075mol/L的KCl）处理，使其中的红细胞及分裂相细胞膜和一部分细胞质除去，最后以气

干法制片，可获得较好的染色体养基中进行培养。人类外周血细胞本来是终末分化细胞，一

般没有分裂能力，但经PHA（植物血球凝集素）或ConA等药物刺激后，转变成可分裂的

转化细胞。

染色体显带是将染色体标本经过一定程序处理，并用特定染料染色，使染色体沿其长轴

显现明暗或深浅相间的横行带纹――染色体带，这种技术，称为染色体显带技术。通过显带，

人们可以准确地识别每一条染色体及染色体上的各个区段，并可发现染色体上较细微的结构

变化。

在所有的显带技术中，G显带（Gbanding）是最常见的显带技术，它是将染色体标本

用碱、胰蛋白酶或其它盐溶液处理后，再用Giemsa染液染色，在普通显微镜下，可见深浅

相间的带纹，称G带（Gband）。G显带方法简便，带纹清晰，染色体标本可以长期保存，

因此被广泛用于染色体病的诊断和研究。

正常人类染色体的数目为46条(23对)，1960年的Denver会议和1963年的London会

议制定了统一的人类染色体命名体制：按照染色体的相对长度、臂比和着丝粒指数，将常染

色体（22对）按大小用阿拉伯数字标记，顺次排列为1～22号，性染色体用X和Y标记；

并按染色体大小和着丝粒位置，把人类染色体分为七个组，用大写字母A～G表示。

染色体经显带处理后，每条染色体都显示出其特定的带纹特征（见下表）。根据这些特

征，可以准确地识别每条染色体，检出染色体数目或结构畸变。

表1人染色体组型及其特征

组别染色体序号形态，大小着丝点位置次缢痕随体

A1~3最大中部着丝粒（1，3）亚中部着丝粒（2）1号染色体

B4~5次大亚中部着丝粒

C6~12X中等亚中部着丝粒9号染色体

D13~15中等近端着丝粒有

E16~18小中部着丝粒亚中部着丝粒16号染色体

F19~20次小中部着丝粒

G21~22Y最小近端着丝粒有

三、实验试剂与器材

试剂：抗凝剂：肝素溶液（500U/ml）；

培养基：RPMI1640,按照说明书配制后抽滤、分装，冻存备用。

小牛血清：市售，冰冻保存，用时在56℃水浴条件灭活。

植物血球凝集素（PHA）：市售，按说明书要求使用

抗菌素：青霉素：50000U/ml，链霉素：50000ug/ml，均用无菌生理盐水配制中的终浓

度均为100U/ml

5%NaHCO

3

秋水仙素：20ug/ml

低渗溶液：0.075mol/L氯化钾

固定液：甲醇：冰乙酸（3：1）

胰蛋白酶溶液：用灭菌生理盐水配制成0.1%的胰蛋白酶溶液，用3%Tris溶液调节pH

至7.0。

Giemsa染液：磷酸缓冲液（pH6.8）10ml加Giemsa原液0.3ml，用时配制。

器