DB51_T2582-2019_应用微卫星DNA标记扭角羚个体司法鉴定技术规范_四川省.docxVIP

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65.020.40

DB51

B61

四川省地方标准

DB51/T2582—2019

应用微卫星DNA标记扭角羚个体司法鉴定

技术规范

2019-05-01实施

发布

四川省市场监督管理局

DB51/T2582—2019

目次

前言................................................................................II

1范围..............................................................................1

2规范性引用文件....................................................................1

3术语、定义和缩略语................................................................1

4PCR引物的选择.....................................................................1

5DNA的提取与检测...................................................................1

6PCR反应与PCR产物测序.............................................................2

7基因分型..........................................................................2

8个体识别..........................................................................3

附录A（规范性附录）扭角羚微卫星标记信息.............................................4

I

DB51/T2582—2019

前言

本标准按GB/T1.1－2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》的规定编写。

本标准由四川省林业和草原局提出并归口。

本标准由四川省市场监督管理局批准。

本标准主要起草单位：四川省林业科学研究院。

本标准主要起草人：靳伟毛毳刘滢询费然夏云。

II

DB51/T2582—2019

应用微卫星DNA标记扭角羚个体司法鉴定技术规范

1范围

本标准规定了利用DNA简单重复序列微卫星分子标记对扭角羚进行司法鉴定的原理、试剂、仪器、

分析步骤和结果判定标准。

本标准适用于四川省扭角羚个体司法鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GA/T383-2002法庭科学DNA实验室检验规范

SN/T1193-2003基因检验实验室技术要求

NY/T1673-2008畜禽微卫星DNA遗传多样性检测技术规程

是指利用扭角羚组织（如毛发、血液、精液、肌肉组织等）或新鲜粪便提取的扭角羚基因组DNA。

用于扭角羚微卫星DNA分子鉴定选用的一套微卫星引物。具有多态性、稳定性、重复性等综合特点。

统一推荐使用9个微卫星标记（附录A），其中1-7号为基本标记，8-9号为备选标记，可根据工作目标选

用合适数量的微卫星标记。只有当基本标记不够用时，才使用备选标记。

1

DB51/T2582—2019

5.1DNA样品准备

通过现场或实验室取样，将DNA样品用蒸馏水洗净后放入盛有95％酒精的离心管中，4℃保存待用。

5.2基因组DNA的提取

采用酚／氯仿抽提方法提取总DNA，具体操作参照《分子克隆实验指南（第3版）》。

其他DNA提取方法若DNA质量能够符合PCR扩增需要的都可用于本标准。

5.3DNA浓度检测

5.3.1紫外吸收定性测试

应保证A260／A280比值在1.8–2.0范围内，方可正常进行后续实验。

5.3.2紫外吸收定量测试

应保证DNA浓度在10μg/mL以上，方可正常进行后续实验。

6PCR反应与PCR产物测序

6.1PCR扩增的反应体系和扩增程序

10×PCRbuffer

MgCl2(25mmol/L)

dNTP(2.5mM)

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