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探寻人卵巢癌肿瘤干细胞样细胞：分离、鉴定与化疗药物敏感性解析

一、引言

1.1研究背景

卵巢癌作为女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，严重威胁着女性的生命健康。据统计，卵巢癌的发病率在女性生殖系统恶性肿瘤中位居第三，仅次于宫颈癌和子宫内膜癌，但其死亡率却高居首位。卵巢癌的解剖部位较为隐蔽，早期症状不典型，约70%的患者在确诊时已处于晚期（III、IV期）。尽管肿瘤细胞减灭术联合以铂类为基础的化疗是目前卵巢癌的标准治疗方案，但由于卵巢癌的高复发率和复发后的高耐药率，患者的5年生存率仍然较低，仅约为43.7%。

传统观念认为，肿瘤是由体细胞突变而成，每个肿瘤细胞都具有无限制生长的能力。然而，这一观点无法解释肿瘤细胞为何具有无限的生命力，以及并非所有肿瘤细胞都能无限制生长的现象。随着研究的深入，肿瘤干细胞（CancerStemCells，CSCs）学说逐渐兴起。该学说认为，肿瘤组织是由异质性的细胞群体构成，其中存在极少量具有干细胞性质的癌细胞亚群，即肿瘤干细胞。肿瘤干细胞具有多向分化潜能和无限的增殖及自我更新能力，是肿瘤发生、发展、侵袭、转移、复发及耐药的决定性因素。肿瘤干细胞可以长时间处于休眠状态，并具有多种耐药分子，对杀伤肿瘤细胞的外界理化因素不敏感。因此，在常规肿瘤治疗方法消灭大部分普通肿瘤细胞后，肿瘤往往会在一段时间后复发。

卵巢癌肿瘤干细胞的研究对于揭示卵巢癌的发病机制、提高治疗效果具有重要意义。卵巢癌肿瘤干细胞可能是卵巢癌发生的根源，其自我更新和多向分化能力使得肿瘤细胞能够不断增殖和扩散。此外，卵巢癌肿瘤干细胞对化疗药物的耐药性可能是导致卵巢癌治疗失败和复发的主要原因之一。因此，深入研究卵巢癌肿瘤干细胞的特性、分离鉴定方法以及对化疗药物的敏感性，对于开发新的治疗策略、提高卵巢癌患者的生存率具有重要的理论和实践意义。

目前，虽然在卵巢癌肿瘤干细胞的研究方面取得了一些进展，但仍存在许多问题亟待解决。例如，卵巢癌肿瘤干细胞的表型尚未完全明确，存在较多争议；其分离鉴定方法仍有待完善，缺乏特异性和高效性；对卵巢癌肿瘤干细胞耐药机制的研究还不够深入，针对卵巢癌肿瘤干细胞的靶向治疗策略仍处于探索阶段。因此，开展人卵巢癌肿瘤干细胞样细胞的分离、鉴定及对化疗药物敏感性的研究具有重要的紧迫性和必要性，有望为卵巢癌的诊治提供新的靶点和思路。

1.2研究目的

本研究旨在从人上皮性卵巢癌细胞系及原代标本中分离并鉴定出卵巢癌肿瘤干细胞样细胞，明确其细胞标志物，深入探究其生物学特性。通过观察不同浓度下卵巢癌肿瘤干细胞样细胞对多种化疗药物的敏感性变化，分析其耐药机制，为卵巢癌的治疗提供新的靶点和策略。同时，本研究的成果也有望为癌症干细胞的研究提供有价值的参考，推动肿瘤干细胞领域的发展。

二、人卵巢癌肿瘤干细胞样细胞的分离

2.1分离方法概述

卵巢癌肿瘤干细胞样细胞的分离是研究其生物学特性及对化疗药物敏感性的关键步骤。目前，常用的分离方法主要有无血清悬浮培养法、磁性细胞分选法和流式细胞分选法，每种方法都有其独特的原理、优势与局限。

无血清悬浮培养法是基于肿瘤干细胞在特定培养条件下能够形成悬浮细胞球的特性。将卵巢癌组织单细胞悬液或腹腔积液中的肿瘤细胞接种于低黏附性的无血清培养基中，并添加促进肿瘤增殖的生长因子，如人表皮生长因子（EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）等。在这种培养环境下，肿瘤干细胞样细胞凭借其自我更新能力，能够不断增殖形成悬浮生长的肿瘤细胞球。1992年，Reynolds等首次采用此法进行神经系统干细胞研究，随后该方法被广泛应用于各种肿瘤干细胞的分离，包括卵巢癌。2005年，Bapat等从晚期卵巢癌患者的腹腔积液中分离出肿瘤细胞，通过无血清悬浮培养获得了具有干细胞特性的悬浮细胞球。该方法的优点在于能够在相对接近体内的微环境中培养肿瘤干细胞样细胞，维持其干细胞特性，操作相对简单，成本较低。然而，该方法分离得到的细胞球并非均一的肿瘤干细胞群体，可能包含其他类型的细胞，纯度较低，且培养周期较长，容易受到污染。

磁性细胞分选法（MagneticCellSorting，MACS）则是借助偶联在磁性微粒上的抗体高特异性识别并标记目标细胞表面抗原。具体操作时，先将卵巢癌组织消化成单细胞悬液，然后与偶联有针对肿瘤干细胞表面标志物（如CD133、CD44等）抗体的磁珠孵育，使磁珠与肿瘤干细胞表面的抗原结合。当混有磁珠的细胞悬液通过磁场时，结合了磁珠的肿瘤干细胞被吸附在磁场侧壁上，而未结合的细胞则被除去，从而实现高效的分选和富集。该方法高效快速，可在2-30分钟内实现105到1011个细胞分选，对实验和技术要求较低，实验流程对细胞损伤小，无菌和细胞状态更有保证，分选得到的