细胞工程第二清洗与消毒.pptVIP

第1页，共38页，星期日，2025年，2月5日培养用品的清洗和消毒灭菌一、清洗：在组织培养中细胞对任何有害物质都十分敏感，因此对新的或用过的培养器皿均需严格清洗。有害成分大多为：微生物、细胞碎片、非营养性化学成分。第2页，共38页，星期日，2025年，2月5日方法：物理灭菌法+化学消毒法1.物理灭菌法：A：紫外线法：无菌室、超净工作台大面积消毒。B：高压蒸汽法：玻璃器皿、滤器、胶塞、解剖用具及耐热液体。C：过滤除菌法：含不耐热成分培养基、试剂等。2.化学消毒法：实验室、无菌室、物体表面消毒。第3页，共38页，星期日，2025年，2月5日1.玻璃器皿清洗：玻璃器皿用于培养细胞、细胞冻存、培养用液的存放等。提供细胞生长的玻璃表面不但要清洗干净，而且要带适当的电荷。苛性碱清洗剂会使玻璃表面带的电荷不适于细胞附着。需以HCl或H2SO4中和。第4页，共38页，星期日，2025年，2月5日一般玻璃器皿的清洗分为4个步骤。A：浸泡：首先清水浸泡，用以软化和溶解；再采用5%盐酸浸泡过夜；新的玻璃器皿在生产过程中常使玻璃表面呈碱性，并带有一些如铅和砷等对细胞有毒的物质，采用酸处理可消除。第5页，共38页，星期日，2025年，2月5日B:刷洗：一般多用毛刷和洗涤剂或洗衣粉洗涤，以去除器皿内外表面的杂质（防止损伤器皿表面，不留死角）。C:浸酸：清洁液由浓硫酸、重铬酸钾及蒸馏水配制而成。具有很强的氧化作用，去污能力很强，对玻璃器皿无腐蚀作用。清洁液：红棕色（有效）--绿色（失效）第6页，共38页，星期日，2025年，2月5日D：冲洗：玻璃器皿经浸泡后，第一步，使用流水彻底冲洗，每个器皿用流水灌满、倒掉，须重复十次以上，直至清洁液全部冲洗干净，不留任何残迹为止。第7页，共38页，星期日，2025年，2月5日清洁液配制比例第8页，共38页，星期日，2025年，2月5日细胞培养物品清洗所需配制的清洁液强度通常为次强液。新配制的清洁液呈棕红色，经多次使用、水分增多或遇有机溶剂时变为绿色，此时表示清洁液已失效，应废弃而重新配制。第9页，共38页，星期日，2025年，2月5日第10页，共38页，星期日，2025年，2月5日安全：配制过程中，应先将重铬酸钾完全溶解于蒸馏水中(必要时可加热帮助溶解)，然后缓慢加入浓硫酸。由于加入浓硫酸时将产生热量，因此配制的容器宜用陶瓷或塑料器皿。一般浸泡过夜，或至少为6h以上。第11页，共38页，星期日，2025年，2月5日2.玻璃滤器：玻璃滤器以烧结玻璃为滤板，固定在玻璃漏斗上。主要用于各种培养用液的过滤除菌，不宜单独过滤血清等粘稠液体，容易堵塞滤板小孔。此种滤器只能连接真空泵在负压条件下抽滤，不能施加正压。第12页，共38页，星期日，2025年，2月5日a．自来水漂洗：用洗衣粉掠洗(不得使用毛刷)过夜。b．自来水抽滤3—5遍至无白沫，水滴滤过夜。c．清洁液抽滤1遍，清洁液滴滤过夜。d．自来水漂洗抽滤5遍，水滴滤过夜。e.蒸馏水抽滤3遍，蒸馏水滴滤过夜。f．二蒸水抽滤2遍，三蒸水滴滤过夜，漂洗。g．烤干备用。第13页，共38页，星期日，2025年，2月5日3.胶塞、盖子等杂物：清洗过程中，初次使用的胶塞因带有滑石粉，应先用自来水冲洗于净，再进行常规清洗；使用后的胶塞、盖子应及时浸泡在清水中，然后用洗涤剂刷洗。用蒸馏水漂洗2—3次,最后三蒸水漂洗1次。晾干备用。第14页，共38页，星期日，2025年，2月5日4.塑料器皿：用后立即以流水冲洗干净或浸入清水中，防止干涸。超声波清洗机内加入少量洗涤剂清洗30min,流水彻底冲洗干净；清洁液浸泡过夜，流水彻底将残留清洁液冲洗干净，蒸馏水漂洗2—3次．三蒸水漂洗2次，晾干备用。第15页，共38页，星期日，2025年，2月5日5.包装：一般用皱纹包装纸、硫酸纸、牛皮纸、棉布等作为包装材料；对培养瓶、滤器、存放培养液用贮液瓶、吸管和胶塞(或培养瓶盖子)等物品的容器瓶口部分做局部包装密封，再用牛皮纸、玻璃纸或布包起来备用。第16页，共38页，星期日，2025年，2月5日二、消毒玻璃培养瓶，移液管，试管等玻璃器皿？超净工作台台面？金属手术器械？不耐热的液体培养基和胰蛋白酶等？橡胶塞和塑料瓶盖等？细胞培养室？操作人员的手部？实验室桌面、地面等？第17页，共38页，星期日，2025年，2月5日（一）重要概念1.消毒：杀死物体上病原微生物的方法；并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物2.灭菌：杀死物体上所有微生物的方法