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货号：C375

CASNO：150347-59-4

活细胞染色

-Cellstain-CFSE

化学名：5-or6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)-3,6-O,O-diacetylfluorescein

别名：CFSE

结构式：

分子式：C29H19NO11

分子量：557.46

价格：

货号

规格

价格（RMB）

备注

C375

1mg

980

现货

性质：

外观：白色或浅黄色粉末

纯度：95.0%?(HPLC)

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产品描述

CFSE能够轻易穿透细胞膜，在活细胞内聚积并与胞内蛋白共价结合，水解后的CFSE释放出荧光物质，这些共价结合的荧光物分子很少从细胞内脱落。CFSE标记后的细胞用于体内观察可以长达数周。因此，CFSE常被用来做活细胞检测试验和用荧光电镜观察细胞长期活动的试验。CFSE标记的细胞的激发和发射波长分别为500nm和520nm。

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染色过程：

1.用DMSO制备1mM的CFSE溶液。用PBS或适当的缓冲液将其稀释成

???10-50μM的CFSE溶液。

2.将1/10细胞培养基体积的CFSE溶液加入到细胞培养基中。

3.在37℃

4.用PBS或适当的缓冲液洗涤细胞两次。

5.用490nm激发波长，530nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。

常见问题:

储存条件：-20℃

参考文献：

1.DiverseEffectsofMethylseleninicAcidontheTranscriptionalProgramofHumanProstateCancerCells????查看

2.ContributionofBCAPtomaintenanceofmatureBcellsthroughc-Rel????查看

细胞增殖检测：CFSE

点击次数：1195?作者：佚名发表于：2008-07-2812:43转载请注明来自丁香园

来源：丁香园

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一、原理

荧光染料CFSE，也可称为CFDASE（5，6-carboxyfluoresceindiacetate，succinimidylester）即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂，是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，这使得CFSE成为一种良好的细胞标记物。当CFSE以含有两个乙酸基团和一个succinimidylester功能基团的形式存在时，不具有荧光性质，而具有细胞膜通透性，能够自由进入细胞；而当其扩散进入细胞内环境，内源的酯酶可将其乙酸基团水解，此种形式的CFSE分子具有很高的荧光活性，被激发能够产生绿色荧光，却不再具有膜通透性；同时，其含有的succinimidylester基团能与胞内的细胞骨架蛋白中的游离胺基反应，最终形成具有荧光的蛋白加合物。因此，当细胞进行分裂增殖时，具有荧光的胞质蛋白被平均分配到第二代细胞中，这样与第一代细胞相比，其荧光强度便会减弱至一半；以此类推，分裂得到的第三代细胞的荧光强度便会比第二代细胞再次减弱。这种现象可以在488nm的激发光下，采用流式细胞仪检测分析，通过检测到细胞荧光强度不断的降低，进一步分析得出细胞分裂增殖的情况。

二、CFSE配制

用DMSO溶解成5mmol/L的储存液，于-20℃避光保存。使用时，用无血清DMEM培养液稀释成5μmol/L的工作液备用。CFSE试剂盒内有一小瓶CFSE（A试剂）标明500ug，另有一小瓶DMSO（B试剂），500ugCFSE溶解于180ulDMSO即是5mMstocksolution。

三、CFSE标记细胞

制作细胞悬液，加入等体积CFSE工作液，于37℃孵育10min，用40%体积的冷小牛血清立即终止标记10min。离心洗涤两次后，用适量的完全培养液重悬细胞。

CFSE的浓度国外报道从0.5uM~20uM都有，建议终浓度为2.5-5uM。浓度太低，细胞标记的荧光强度不够，太高了对细胞有毒性，且影响细胞增殖。标记孵育时要经常摇匀。

细胞增殖检测方法：总论

点击次数：619?作者：佚名发表于：2008-07-2812:12转载请注明来自丁香园

来源：丁香园

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一、胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）渗入法

胸腺嘧啶核苷（TdR）是DNA特有的碱基，也是DNA合成的必需物质。用同位素3H标记TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体能掺入DAN合成代谢过程，通过测定细胞的放射性强度，可以反映细胞DAN的代谢及细胞增殖情况。但是具有放射性。

二、MTT检测法

MTT检测法主要反映细胞的能量代谢，是检测细胞增殖活力的一种简