流式常用试剂配制.docVIP

一、流式细胞术常用试剂

1、10％NaN3：将10gNaN3溶解于100ml蒸馏水中，室温保存；活体实验或在辣根过氧化酶反应中可不使用NaN3。

2、3％BSA/PBS：100mlPBS中加入3gBSA，使之溶解，再加入0.2ml10％的NaN3。

3、500mmol/LEDTA：将186gEDTA?Na2?2H2O溶解于400ml蒸馏水中，用NaOH将PH调至8.0，补充蒸馏水至500ml，分装，高压灭菌，室温保存。

4、4％多聚甲醛：在磁力搅拌下，将4g多聚甲醛溶于100mlPBS，加入数滴NaOH，在通风柜中于60度加热，使其溶解，调整PH至7.4，使用前新鲜配制。

5、消化液：0.25％胰蛋白酶（用培养液或PBS配制）或0.25％胰蛋白酶与0.02％EDTA的混合液。

6、红细胞裂解液：NH4Cl4.16g，KHCO30.5g，EDTA?2Na0.02g，溶于100ml水中，调PH至7.2，补充蒸馏水至500ml，4度储存，使用时需恢复至室温。

7、流式细胞抗体稀释剂：0.1mmol/LPBS液（PH7.4）＋1％BSA＋0.1％Na2N3。

8、常用细胞破膜剂：PBS液（PH7.4）＋1％FBS（或BSA）＋0.1％NaN3＋0.1％saponin（Sigma的效果不错）。

9、流式细胞染色洗涤液：含2％的BSA、0.1％NaN3的PBS（PH7.4）。

10、PI染液（保存液，10×，用于细胞周期和凋亡检测）：10mgPI溶于10mlPBS，加入2mg无DNA酶的RNA酶，4度保存备用。应用时，10倍稀释，每管加0.3ml～0.5mlPI染液。

11、Hanks液的配制（BSS，主要用于培养液、稀释剂和细胞清洗液，不能单独作为细胞、组织培养液）

原液A

NaCl160g

MgSO4?7H2O2g

KCl8g

MgCl?6H2O2g

CaCl22.8g

溶于1000ml双蒸水

原液B

1）Na2HPO4?12H2O3.04g

KH2PO41.2g

葡萄糖20.0g

溶于800ml双蒸水

2）0.4％酚红溶液：取酚红0.4g置玻璃研钵中，逐滴加入0.1NNaOH并研磨，直至完全溶解，约加入0.1NNaOH10ml。将溶解的酚红吸入100ml量瓶中，用双蒸水洗下研钵中残留的酚红液，并入量瓶中，最后补加双蒸水至100ml。

将1）液和2）液混合，补加双蒸水至1000ml即为原液B。

应用液：

原液A1份

原液B1份

双蒸水18份

混合后，分装于200ml小瓶中，高压灭菌。临用前用无菌的5.6％NaHCO3调PH至7.2～7.6。

12、磷酸盐缓冲液的配制（PB）

A液（0.2mol/LNaH2PO4水溶液）：

NaH2PO4?H2O27.6g，溶于蒸馏水中，稀释至1000ml。

B液（0.2mol/LNa2HPO4水溶液）：

Na2HPO4?7H2O53.6g加蒸馏水溶解，加水至1000ml。

不同PH值PB的配制：

A液xml（参照下表）中，加入B液yml，为0.2mol/L的PB。若再加蒸馏水至200ml，则成0.1mol/LPB。

PHx/mly/ml

5.793.56.5

5.892.08.0

5.990.010.0

6.087.712.3

6.185.015.0

6.281.518.5

6.377.522.5

6.473.526.5

6.568.531.5

6.662.537.5

6.756.543.5

6.851.049.0

6.945.055.0

7.039.061.0

7.133.067.0

7.228.072.0

7.323.077.0

7.419.081.0

7.516.084.0

7.613.087.0

7.710.090.0

7.88.5091.0

7.97.0093.0

2）光淬灭性很强，要绝对避光。

12、PE-Cy7：激发波长488nm，最大发射波长767nm。

1）在BeckmanCoulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；

2)可适用于大、小功率的流式细胞仪；

3）光淬灭性很强，要绝对避光；

4）可与FITC、PE搭配，与FITC无光谱重叠，与APC搭配荧光干扰小，补偿小，是比较理想的搭配。

13、TR：激发波长595nm，最大发射波长615nm。

1）其标记的抗体适用于配备TexasRed激光器的流式细胞仪；

2）荧光不易淬灭，可用于荧光显微镜。

14、APC：激发波长633/635nm，最大发射波长660nm。

1）其标记的抗体适用于所有配备氦氖