华大基因测序技术基础原理.pptVIP

测序技术基础;;;Sanger测序法原理;IlluminaGenomeAnalyzer

ABISOLiD

Roche454;二代测序技术;IlluminaSolexa

ABISOLiD

Roche454;可逆阻断技术;IlluminaSolexaFlowcell;;;;ClusterGeneration序列簇的产生;OH;;SequencingBySynthesis

边合成边测序;;BaseCalling

碱基识别;PairedEnd;PairedEnd

双末端测序、正反双向测序;SamplePreparation;OH;Template

hybridization;;;Sequencingbiochemistry

;Illuminasolexa

ABISOLiD

Roche454;SOLID测序技术;AB/SOLIDWorkflow工作流程;文库制备

EmulsionPCR

BeadsEnrichment

微珠沉积

连接测序

数据分析;序列可以用超声波、机械剪切或酶解等措施，随机或者定向的打断成小片段;（大片段两头测序）;酶切为粘性末端;文库制备

EmulsionPCR

微珠富集

微珠沉积

连接测序

数据分析;2.EmulsionPCR;;BeadscollectedfollowingemulsionPCR:;文库制备

EmulsionPCR

微珠富集

微珠沉积

连接测序

数据分析;3.Enrichment/微珠富集;文库制备

EmulsionPCR

微珠富集

微珠沉积

连接测序

数据分析;4.Depositebeads;文库制备

EmulsionPCR

微珠富集

微珠沉积

连接测序

数据分析;;5.SOLiD4-colorligationreaction;;TemplateSequence;;Consequencesof2BasePairEncoding

;;ABISOLiD;Illuminasolexa

ABISOLiD

Roche454;GenomeSequencer20Syste（）

GenomeSequencerFLXSyste（）

GSFLXTitanium（）;;;2.EmulsionBasedClonalAmplification;3.LoadingDNABeadsintothePicoTiter?Plate;dNTPPPi

PPi+APSATP

ATP+LuciferinluciferaseOxyluciferin+Light;Thesequencinginstrumentconsistsofthefollowingmajorsubsystems:

(a)afluidicassembly，

(b)aflowchamberthatincludesthewell-containingfibre-opticslide，

(c)aCCDcamera-basedimagingassembly，

andacomputerthatprovidesthenecessaryuserinterfaceandinstrumentcontrol.;Roche454;第二代测序技术小结;第一代测序技术

versus

第二代测序技术;Currentpopularsequencingplatform;第三代测序技术;Heliscope单分子测序仪

--HelicosBiosciences;斯坦福大学的科学家近来运用HelicosBiosciences的Heliscope单分子测序仪，对一名白人男子的基因组进行了测序，文章刊登在必威体育精装版一期的《NatureBiotechnology》在线版上。运用一台Heliscope测序仪和4次数据搜集运行，完毕了本次测序。

研究人员汇报称，他们产生了数十亿个Heliscope序列读取，覆盖了90%的人参照基因组，覆盖度达28倍。序列读长为24到70个碱基，平均读长为32个碱基。到目前为止，他们已经鉴定出280万个SNP和752个拷贝数变异。

测序花了4个星期的时间，试剂花费为48000美元

;Singlemoleculerealtime(SMRT)DNA测序技术—PacificBiosciences;纳米孔单分子技术

--OxfordNanopor