胚胎试验在水生动物中的应用.pptxVIP

胚胎试验在水生动物中的应用李康

急性暴露试验虽然简便易行，但是其检测指标过于简单。各种慢性毒性试验虽然提供多个检测终点，但存在实验周期长、费用高等不足。而水生生物胚胎试验具有成本低、影响因素少、灵敏度高等方面的优势，受试物种也由最初的鱼类向多样化发展，其应用日益广泛。010302建立灵敏、简便易行的检测方法

鱼类成体和胚胎试验灵敏度比较

胚胎试验是又称胚胎毒性试验或胚胎致畸试验，指通过把胚胎暴露于受试化学物质而受到毒害作用，继而影响胚胎的发育、导致胚胎发育停滞或胚胎畸形。广义上的胚胎试验包括所有以胚胎为材料的生物学试验，其内容涵盖形态学、发育学、毒理学、行为学等方面。胚胎试验

鱼类鱼类因具有繁殖力高、体外产卵、体外受精等生殖特性成为胚胎试验的最主要材料。

用于胚胎试验的一些种类

STEP2STEP1斑马鱼在实验室内对单一物质的毒性评价往往使用特定的种类，斑马鱼是其中一个重要代表。欧洲和美国都有已经建立的标准方法。

Zebrafish(Daniorerio)

01草虾属广盐性甲壳动物(3-31ppt)。03个体小，只要水温，光照条件适宜，成体在实验室容易繁殖，只需分离不同发育阶段的胚胎即可用于试验。02分布广(遍布美国东海岸和墨西哥湾的广大河口)。04尽管雌体产卵后抱卵于腹部直至孵化，胚胎离体后同样可以正常发育至孵化，卵外被膜、胚胎透明而易于观察形态异常。05甲壳类——草虾

Grassshrimp(Palaemonetespugio)

Grassshrimp(Palaemonetespugio)

TheFrogEmbryoTeratogenesisAssay-Xenopus(FETAX)——爪蟾ASTME1563-98:StandardguideforConductingStaticAcutetoscicityTestswithEchinoidEmbryos——海胆其它动物

Medaka(Oryziaslatipes)

Bluecrab(Callinectessapidus)

被广泛利用1在实验室内容易大量培养2具有代表性和对受试物的敏感性3遗传背景清楚试验动物的饲养也有相应的规范4试验动物的选取

多数鱼类产卵后离体孵化，易于收集。一般可采用亲鱼人工催产结合人工受精的方法获得。对于如斑马鱼，青鳉等小型种类，在实验室内养殖相对容易，只需控制适当的物理条件，一般都能在试验当天取到足够数量的受精卵。020301胚胎来源

收集鱼卵在实验室完成剩余的发育过程，检测多个终点指标。原位暴露在室内得到受精卵，用适当的装置放置于待检测的地点，全部发育过程或绝大部分发育过程在野外完成。有抱卵习性的甲壳动物，胚胎在母体腹部附肢发育成幼体，通过捕捞带卵的母体，分离胚胎。野外试验

胚胎试验同样可分成急性毒性试验和亚急性毒性试验。急性毒性试验时间较短，其目的是获得有关受试物的初步毒性信息；亚急性毒性试验时间较长，可以贯穿胚胎发育的整个时期。暴露途径可分为静态，半静态和流动等，或微注射的途径。分类

透明的试验容器通常是首选，烧杯、培养皿、培养管是最普通的工具。01在野外暴露试验中，有黏性的受精卵可以被直接负在载玻片上，后者固定在特制的容器里。02容器

溶剂1有机物质水溶性较差，则需要化学溶剂来助溶，但不适当的溶剂会影响结果的可靠性，化学溶剂本身对胚胎具有毒性甚至会和受试物产生协同作用，因此，选用适当的溶剂以及适当的浓度对结果的准确性都是有益的。乙醇，丙酮，二甲亚砜是常用的溶剂，终浓度一般在0.1%以下。2

5%(V/V)乙醇1%(V/V)乙醇对照Grassshrimp(Palaemonetespugio)

半致死浓度（LC50）01形态异常02孵化延迟03生化指标04遗传物质05生长指标06检测终点

半致死浓度（LC50）01死亡是检测的可见终点，初步反映受试物的毒性，是急性毒性试验的常用指标。02孵化也可作为终点来反映受试物毒性，指标采用半效应浓度（EC50）。03在发育早期可以胚胎完整性来判断存活与否，当器官出现后则用器官的运动作为标准。04半致死浓度（LC50）

形态异常是胚胎致畸试验的核心内容。01斑马鱼和爪蟾胚胎发育过程中有多种可以观察的反应指标，被列入标准方法的观察终点。02对于甲壳动物，常见的观察结构有眼、卵黄形状、心脏、头部、肝胰腺。03发育异常往往会导致导致终止发育或发育延迟，进而推迟孵化时间。04形态异常

B=brain;C=chorda;Ch=chorion;E=ear;Ed=edema;Eud=earunderdeveloped;Ey=eye;Eyud=eye