混合斑的检验教学课件.pptVIP

第十五章混合斑的检验基本概念：混合斑是指两名或两名以上个体的血液或体液、分泌液混合形成的斑痕构成分类：不同个体同一种体液或分泌液混合而成----最常见的是混合血痕不同个体的不同体液或分泌液混合而成----最常见的是精液阴道分泌液混合检测方法：经典方法----直接检测混合斑的遗传标记，然后与案件相关个体进行比对现代方法----分离混合斑中成分，分别进行遗传标记的检测检验程序：确证检材是否是混合斑------然后检测遗传标记一、精液与阴道液混合斑1混合斑的确证精斑：细胞学方法-----精子的检出免疫学方法-----精斑确证最好试剂----抗P30血清生化学方法-----LDH-X阴道斑：细胞学方法阴道上皮细胞HE染色：大而扁平、形态不规则、细胞浆红染嗜碘试验：斑痕沉淀涂片，干燥后+2滴Lugo’s碘液---2~3min镜检呈红褐色或深黄褐色，（口腔上皮细胞不染色）生化学方法阴道肽酶（VP）是一种催化肽键水解的酶仅存在女性生殖道分泌液中，与年龄、性活动、月经周期无关。方法：淀粉凝胶电泳L-缬氨酸-L-亮氨酸注意：阳性检出率只有64%，故阴性结果不能否定阴道液存在检出期限为7个月。?2混合斑中精液成分的个人识别ABO血型检测对比推断中和试验、解离试验、ELISA法等对照种类：嫌疑人、被害人及被害人丈夫的血液和唾液?结果分析：????注意事项：混合成分的比例影响不同种类血型物质的检出分泌型的强弱，可以提供有用的信息混合斑被害人精液可能的血型嫌疑人ABSeseABSe???ASeABSe、BSe???BSeABSe、ASe???OSeABSe???ABSeABSe、Ase、Bse、OSe??特异成分

精子ABO血型检验----混合凝集

原理：抗原与抗体发生特异性结合后，再加入相应的红细胞时，抗体又同红细胞结合，结果形成检材抗原-抗体-红细胞三者结合

试剂：抗体效价：256倍指示红细胞：5%

精浆ABO血型检验----α2-精浆糖蛋白分子中的ABH抗原

糖链----ABH特异性抗原，用A、B、O红细胞和AB型人血清吸收

蛋白----有器官特异性抗原

解离试验

Y+混合斑的浸出液ELISA夹心法

血清型、酶型对比推断：血清型----Gm、Km酶型----PGM1、Fu

DNA分析常染色体：关键---获得纯净的精子DNA-----差异裂解或二步抽提法原理：精子细胞的表面蛋白含有大量的二硫键，可以抵抗去垢剂SDS核蛋白酶K的消化，而其他组织的细胞膜则可以被这两种物质消化。方法：第一步：检材+1%SDS+100ug/ml蛋白酶K---37度2~3h500r/min离心15min、去上清，精子留在沉淀物中第二步：+40Mm/LDTT+1%SDS+100ug/ml蛋白酶K----注意：消化条件选择----主要是第一步消化时间消化不完全----当阴道上皮细胞过多，不能使两者彻底分离过渡消化----可能消化一部分精子细胞，导致精子DNA减少***实际操作前，应进行涂片检查，根据精子和阴道上皮细胞的比例，对消化时间、温度、试剂的浓度等进行适当的调整提取方法