2026届高三高考总复习创新设计课件生物专题练15RT－PCR、反向PCR与PCR定点诱变技术.pptxVIP

RT－PCR、反向PCR与PCR定点诱变技术(时间：40分钟)专题练15

1.(2025·山东青岛模拟)将草甘膦抗性基因转入甘蓝植株，获得抗草甘膦转基因甘蓝。回答下列问题：

(1)草甘膦抗性基因一条链的两端序列如图1所示，采用PCR技术获取和扩增草甘膦抗性基因时应选用的2种引物序列是___________________________________________(标出5′端和3′端)。若初始加入1个草甘膦抗性基因，则历经4次PCR循环需要消耗引物数量为________个。5′－CTTGGATGAT－3′和5′－TCTGTTGAAT－3′30

(2)图2中步骤③将农杆菌与甘蓝愈伤组织共培养后，在步骤④的培养基中添加________以便筛选出含目的基因的甘蓝植株。添加此抗生素而不选用添加另一种抗生素筛选的原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。潮霉素由图可知，潮霉素抗性基因在T－DNA片段，卡那霉素抗性基因不在T－DNA片段，所以潮霉素抗性基因可随T－DNA转移到被侵染的细胞中，并且随其整合到该细胞的染色体DNA上，从而使含目的基因的甘蓝植株有抗潮霉素的抗性，所以能在含潮霉素的培养基上筛选含目的基因的甘蓝植株

(3)若要获得抗除草剂能力更强的转基因甘蓝植株，可以用草甘膦抗性基因进行改造，最终得到相应的蛋白质，该过程需用到________工程。检测转基因甘蓝植株是否产生抗除草剂蛋白，所用的方法是________________。蛋白质抗原—抗体杂交

(4)为确定步骤③中T－DNA(碱基序列已知)的插入位置，往往需要用反向PCR技术测定插入部位的碱基序列，其原理如图3：①不直接在图3a中的DNA分子的两端设计引物并进行扩增，原因是___________________________________________。②PCR测序与反向PCR________(填“可以”或“不可以”)选用相同的一对引物，原因是_________________________________________________________。T－DNA两端序列未知，无法设计引物可以PCR测序与反向PCR扩增的片段相同，可选用相同的一对引物

解析(1)图1所示碱基序列磷酸端为5′端，羟基端为3′端，在进行PCR操作时，引物应分别从基因两条链的3′端根据碱基互补配对原则结合，根据图中两端序列可推知选用的2种引物序列是5′－CTTGGATGAT－3′和5′－TCTGTTGAAT－3′。若初始加入1个草甘膦抗性基因，则历经4次PCR循环可形成16个DNA分子，其中原有2条母链的没有引物，其余子链都有引物，故需要消耗引物数量为15×2＝30(个)。

(2)图2中步骤③将农杆菌与甘蓝愈伤组织共培养后，在步骤④的培养基中添加潮霉素以便筛选出含目的基因的甘蓝植株。由图可知，潮霉素抗性基因在T－DNA片段中，卡那霉素抗性基因不在T－DNA片段中，所以潮霉素抗性基因可随T－DNA转移到被侵染的细胞，并且随其整合到该细胞的染色体DNA上，从而使含目的基因的甘蓝植株有抗潮霉素的抗性，所以能在含潮霉素的培养基上筛选含目的基因的甘蓝植株。

(3)对草甘膦抗性基因进行改造，最终得到相应的蛋白质，该过程需用到蛋白质工程。检测转基因甘蓝植株是否产生抗除草剂蛋白，可以用抗原—抗体杂交的方法。(4)①不直接在图3a中的DNA分子的两端设计引物并进行扩增，原因是T－DNA两端序列未知，无法设计引物。②由于PCR测序与反向PCR扩增的片段相同，所以PCR测序与反向PCR可选用相同的一对引物。

2.(2025·山西临汾质检)沿海滩涂土壤盐碱化程度高，作物产量低。实验人员将植物乙中的耐盐碱基因a导入作物甲，获得了转基因耐盐碱的作物甲。实验人员通过PCR技术对转基因作物甲中的基因a进行检测，过程如图1所示。回答下列问题：(1)实验人员提取转基因作物甲的总DNA作为PCR扩增的______，PCR扩增所依据的原理是__________________。模板DNA半保留复制

(2)PCR扩增时除要加入耐高温的DNA聚合酶外，还需要引物。设计图1中引物1和引物2的核苷酸序列时需要注意的事项有_________________