第四章反义核酸与核酶.pptVIP

第一个反义药物——福米韦生3临床疗效前3周每周福米韦生165μg玻璃体内注射，以后每2周给药1次，用药组和对照组病情进展时间中位数分别为71和14天福米韦生可以降低病人体内的CMV活性，呈剂量-效应关系病情发展到威胁视力的病人，使用福米韦生后症状有所好转，病情进展明显延缓4不良反应最常见不良反应是暂时性眼内压升高和轻、中度眼前、后房炎症反应所有研究对象均未发生视网膜剥脱和全身毒性反应高剂量可引起少数病人外周视网膜色素沉着及周边视力下降与眼外科手术相比，玻璃体内注射发生出血、眼内炎和视网膜剥脱的风险要小得多第30页，共76页，星期日，2025年，2月5日第一个反义药物——福米韦生5适应证和禁忌证福米韦生为二线治疗药物，适用于对其他治疗措施不能耐受或没有效果或有禁忌的病人；禁用于2～4周内使用西多福韦（cidofovir）治疗的病人，以免增加发生眼内炎的危险性6与治疗CMV视网膜炎的其他药物比较更昔洛韦、西多福韦和膦甲酸钠是CMV抑制剂，而非杀死剂；具有交叉耐药性；可产生肾毒性；插管给药、植入制剂费用昂贵、重复手术以及视网膜剥脱发生率高（28%）使应用受限福米韦生具有阻止病毒复制，疗效持久、用药次数少，不良反应少而轻，局部玻璃体内注射给药优于其他上述提及的给药方法7展望第31页，共76页，星期日，2025年，2月5日受体介导的转移技术受体介导DNA转运技术的启发实现DNA和RNA的转运例：脱唾液酸血清类粘蛋白(ASGP)受体唾液酸血清类粘蛋白—唾液酸→ASGPASGP+PL（多聚赖氨酸）→ASGP-PL复合物反义RNA+ASGP-PL复合物→ASGP-PL-反义RNA复合物ASGP-PL-反义RNA复合物→肝细胞表面ASGP受体识别→吞噬→释放→发挥作用优点：专一性强，抗降解能力强第32页，共76页，星期日，2025年，2月5日以聚合物微球为载体的输送系统目前研究最多的聚合物微球是聚丙交酯及乳酸一羟乙酸（LA-GA）以丙交酯和乙交酯为单体形成的共聚物，降解属于水解反应产物均为人体正常代谢物，降解时间取决于两种单体的配比和聚合物的分子量构成的结合复合体具有潜在的转运反义核苷酸和核酶的作用第33页，共76页，星期日，2025年，2月5日核酶技术及其应用核酶(Ribozyme)——一种具有核酸内切酶活性的RNA分子，可特异性地切割靶RNA序列，具有解离后重复切割相同靶分子的能力第34页，共76页，星期日，2025年，2月5日核酶发展简史1968年，FrancisCrick在他的论文“基因密码的起源”一文中提到：“可能第一个酶是具有复制能力的RNA”，没有人予以注意1987年，第52届冷泉港定量生物学国际讨论会上，AlanWeiner做会议总结时重复了20年前FrancisCrick的话，会议注意力已集中到最近发现的具有酶活性RNA分子上1989年，诺贝尔化学奖授予了分别独立地发现具有酶活性的RNA分子的Thomas.R.Cech（ColoradoUniversity）SidneyAltman（YaleUniversity）第35页，共76页，星期日，2025年，2月5日ThomasR.Cech切赫，美国人因发现RNA生物催化作用与S.Altman同获1989年诺贝尔化学奖独立发现RNA不仅被动地传递遗传信息，还能催化细胞内生命所必需的化学反应，1982年公布其研究结果，1983年证实RNA的酶活动此前，人们认为仅蛋白质才能起酶的作用第36页，共76页，星期日，2025年，2月5日核酶的发现研究目的：rRNA中一些无意义的序列，或内含子(intron)，如何从RNA分子中剪切下来？研究对象：原生动物四膜虫(TetrahymenaThermophila)，只含一种RNA，除rRNA外还有一个由413个核苷酸组成的插入序列(interveningsequenc，IVS)研究发现：转录产物rRNA前体很不稳定，在鸟苷和Mg2+存在下切除自身的IVS，使两个外显子拼接起来，变成成熟的rRNA分子。催化反应是在无任何蛋白质酶存在下发生的，称为自我剪接研究结论：IVS具有类似蛋白酶的功能，能够打断及重建磷酸二脂键rRNA前体能靠自己完成剪接过程，在一定条件下按一定方式盘绕，进而切割自己，以后再把保留部分连接起来