生化制品检测技术免疫核糖核酸的检测09课件.pptxVIP

生化制品检测技术免疫核糖核酸的检测

31免疫核糖核酸的质量检测

（一）质量检查iRNA没有明显的种属特异性。所以，用于人体无免疫原性。但对制品的热原反应应符合中国药典规定，蛋白含量应小于RNA的1%。（二）含量测定iRNA含量用定磷法测定。操作步骤如下：免疫核糖核酸的质量检测

（1）标准曲线制作分别取标准磷酸盐溶液（用磷酸二氢钾配制成5μg/mL）0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL，加定磷法试剂（3mol/L硫酸:2.5%钼酸氨:水:10%抗坏血酸＝1:1:2:1）3mL，45℃保温20min，于660nm波长处测光吸收度。以含量（μg）作横坐标，光吸收度为纵坐标，作标准曲线，求出光吸收度为1.0时的含磷微克数、即标准曲线常数K。K值因仪器、试剂及测试条件的不同而异，故每次含量测定时均要作标准曲线，且样品测试的仪器、试剂和条件都要与作标准曲线时相同。免疫核糖核酸的质量检测

（2）样品总磷量测定将样品配成2.5～5mg/mL，取1mL，加1mL18mol/L浓硫酸及约50mg催化剂（CuSO4·5H2O），消化（小火加热至发白烟，样品由黑色变成淡黄，取下稍冷，小心滴加2滴30%过氧化氢，再继续加热至溶液无色或淡蓝色，冷却，加1mL水，100℃下加热10min以分解消化过程中形成的焦磷酸）。空白对照不加样品消化。两者均定容至50mL。取样品及对照品各1mL，加蒸馏水2mL、定磷试剂3mL，测660nm波长处的光吸收度（操作同前）。（3）样品无机磷含量测定取未经消化样品1mL，定容至50mL，再取其中1mL测660nm波长处的光吸收度，空白对照用蒸馏水。免疫核糖核酸的质量检测

4）含量计算：式中：A总磷:660为总磷在660nm处的光吸收度；A无机磷:660为无机磷在660nm处的光吸收度；K为标准曲线常数；D为稀释倍数，即（消化后定容毫升数）/（消化时取样毫升数），此处为50；n为磷含量与核酸含量间的关系，即每1mg磷相当于11mgRNA；C为样品的浓度，单位为mg/mL；由于求K值时的浓度单位为μg/mL，故应乘以103。免疫核糖核酸的质量检测

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