其他基因工程工具酶DNA聚合酶把脱氧核糖核苷酸连续地加到双.pptxVIP

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2025-07-22 发布于陕西
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其他基因工程工具酶DNA聚合酶把脱氧核糖核苷酸连续地加到双.pptx

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第二节基因工程制药中的工具酶其他基因工程工具酶DNA聚合酶把脱氧核糖核苷酸连续地加到双链DNA分子引物链的3’-OH末端，催化核苷酸的聚合作用，而不发生从引物模板上解离的情况，能够催化DNA复制和修复DNA分子损伤在基因工程操作中的许多步骤都是在DNA聚合酶催化下进行的DNA体外合成反应常用的DNA聚合酶：大肠杆菌DNA聚合酶、大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow大片段酶、T4DNA聚合酶、T7DNA聚合酶、经修饰的T7DNA聚合酶(测序酶)、耐热DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶和AmpLiTaqTM)、反转录酶

第二节基因工程制药中的工具酶其他基因工程工具酶反转录酶具有反转录酶活性和RnaseH活性主要作用：以mRNA为模板合成cDNA，用以建立cDNA文库

第二节基因工程制药中的工具酶其他基因工程工具酶末端核苷酸转移酶（terminaltransferase）一种DNA聚合酶，能催化5’脱氧核苷三磷酸进行5’－3’方向的聚合作用，逐个地将脱氧核苷酸分子加到线性DNA分子的3’-OH末端。不需要模板，可以用含有的3’-OHＤＮＡ片段为引物，在3’-OH端加入核苷酸达几百个。作用的底物可以是具有3’-OH末端的单链DNA,也可以是具有3’-OH突出末端的双链DNA

第二节基因工程制药中的工具酶其他基因工程工具酶碱性磷酸酶来自于大肠杆菌（bacterialalkalinephosphataseBAP）或牛小肠（calfintestinalalkalinephosphataseCIP），该酶用于脱去DNA（RNA）5’末端的磷酸根，使5’-P成为5’-OH，该过程称核酸分子的脱磷酸作用。当需要5’端同位素标记或为了避免DNA片段自身连接（或环化）时可进行脱磷酸反应。