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Results
eNOSIsaDirectTargetofmiR-155
ComputationalmiRNAtargetanalysisshowedthatmiR-155isabletobindtotheeNOS
mRNA3′-UTR,suggestingthisgenemaybeapotentialmoleculartargetformiR-155
(Figure1A).ToexaminewhethermiR-155canrepresseNOpressionthroughdirect3′
-UTRinteraction,weclonedeNOS3′-UTRluciferasereporterplasmidandperformed
reporteranalysisinCos-7cells.Ourresultsdemonstratedthatcotransfection
ofpre-miR-155witheNOS3′-UTRreporterresultedindosedependentinhibitionof
luciferaseactivity(Figure1B,n=6,P0.01versuscontrol).However,miR-155failedto
represstheactivityofeNOS3′-UTRreporterwithamutatedmiR-155seedsequence
(Figure1B,n=6).Moreover,wedeterminedtheeffectsofmiR-155oneNOpressionin
pc3-eNOS-3′-UTRoverexpressedCos-7celllines.Inagreementwiththereporter
assays,overexpressionofmiR-155repressedeNOSproteinexpressionina
dose-dependentmanner(FigureS1,availableintheonline-onlyDataSupplement).
ThesedataindicatedthateNOSisadirecttargetofmiR-155.
miR-155DownregulatedEndogeneouseNOpressioninHUVECsbyDestabilizing
eNOSmRNA
TofurthervalidatewhethermiR-155candownregulateeNOpression,wetestedthe
effectsofmiR-155onendogenouseNOSlevelsinHUVECsinfectedwithadenovirus
harboringprematuremiR-155(Ad-miR-155).OverexpressionofmiR-155for48hours
reducedeNOSproteinexpressioninadose-dependentmanner(Figure2A).Significantly,
downregulationofeNOpressioncorrelatedwithdecreasesofeNOSactivityandNO
productioninHUVECs(Figure2Band2C).miRshavebeenproposedtocontrolgene
expressionattheposttranscriptionall
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