提纲药学讲稿.pdfVIP

提纲

1.标题

2.梗概

3.性质简介

4.靶标的筛选（配图说明）

5.噬菌体展示技术

6.靶标的确证（配图说明）

7.参考文献

具体文本（略）

1.IdentificationofhNopp140asabindingpartnerfor

doxorubicinwithaphagedisplaycloningmethod.

2.阿霉素是一种广泛使用的抗癌药物。假设通过抑制或

转录行动，虽然其准确的目标和细胞毒性的机制仍然没有得到解

决。表达人肝细胞c一个T7噬菌体中筛选对固定阿霉素

孤立阿霉素结合蛋白。选定的噬菌体含有核仁磷酸蛋白Nopp140，

在核仁的生物合成的一个重要因素的C-末端区域。当所克隆的

序列在大肠杆菌中表达时，重组蛋白磷酸化酪蛋白激酶II和低

聚在镁离子和氟离子的存在下，如发生在体内。阿霉素结合到表

达的蛋白为4.5×10-6M的解离常数，并且这种相互作用被抑

制Nopp140的磷酸化。这些结果表明，阿霉素可能会破坏

hNopp140的细胞功能。

3.药品名称阿霉素

别名14-羟基柔红霉素，阿得里亚霉素，多柔比星

外文名称Doxorubicin

主要适用症适用于急性白血病，恶性淋巴瘤、等

用法用量40mg～60mg/m2，3周1次。

药品类型抗药-细胞毒类药物

4.通过生物淘选阿霉素特异的噬菌体扩增

甲T7噬菌体展示人类肝细胞c中筛选蛋白质特异性结合

的生物素化的多柔比星（图1）上的链霉亲和涂层板。洗脱解决

方案的噬菌体滴度从103PFU/ml的第一轮105PFU/ml的第四

轮的结合和洗脱（图2A）后增加。以确认特定的噬菌体颗粒的

富集，到洗脱的噬菌体的c通过PCR用引物侧翼的T7噬

菌体的施工现场进行分析。从第一轮洗脱的噬菌体扩增

产物出现作为涂片带（图2B，泳道1）。从第二，第三和第四轮

扩增洗脱的噬菌体的PCR产物（图2B，泳道2,3和4），然而，

发现在600和870bp的条带。这些结果表明，阿霉素特异性噬

菌体的生物淘选程序选择性地扩增。

5.噬菌体展示技术是将多肽或蛋白质的编码或目的片

段克隆入噬菌体外壳蛋白结构的适当位置，在阅读框正确且

不影响其他外壳蛋白正常功能的情况下，使外源多肽或蛋白与外

壳蛋白融合表达，融合蛋白随子代噬菌体的重新组装而展示在噬

菌体表面。被展示的多肽或蛋白可以保持相对独立的空间结构和

生物活性，以利于靶分子的识别和结合。肽库与固相上的靶蛋白

分子经过一定时间孵育后，洗去未结合的游离噬菌体，然后以竞

争受体或酸洗脱下与靶分子结合吸附的噬菌体，洗脱的噬菌体感

染宿主细胞后经繁殖扩增，进行下一轮洗脱，经过3轮～5轮的

“吸附-洗脱-扩增”后，与靶分子特异结合的噬菌体得到高度富

集。所得的噬菌体制剂可用来做进一步富集有期望结合特性的目

标噬菌体。

6.阿霉素和硫氧还hNopp140C之间的结合直接测量

阿霉素和硫氧还hNopp140C之间的相互作用是通过荧光光谱法

和表面等离子体分析分析。阿霉素具有530-600纳米的发光

光谱与