17　第一部分　模块五　专题(十三)　基因工程.docx

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专题(十三)基因工程

1．基因工程的基本工具

提醒：两种不同的限制酶切割不同的DNA片段，产生相同的黏性末端，这两种限制酶称为同尾酶。

2．基因工程的基本操作程序

提醒：①目的基因的插入位点不是随意的，基因表达需要启动子与终止子的调控，所以目的基因应插入在启动子与终止子之间。当需要目的基因在特定细胞中表达时，需要利用特定的启动子，如目的基因要在乳腺细胞中表达时，启动子要换成乳腺蛋白基因的启动子。②鉴定目的基因的插入与转录，可使用PCR技术或分子杂交技术。

3．蛋白质工程

4．DNA的粗提取与鉴定

5．PCR技术

6．DNA片段的电泳鉴定

提醒：DNA电泳鉴定中的“两液两剂”

①电泳缓冲液维持整个电泳体系的pH稳定，提供导电介质，影响物质的电泳迁移率。②凝胶载样缓冲液(内含指示剂)主要用于样品的稀释和保护，同时通过指示剂指示样品在凝胶中的位置，有助于判断电泳是否完成，以及何时停止电泳。③核酸染料是用来染色DNA分子的一种化学物质，以便在紫外灯下观察和检测核酸条带。

1．(2024·湖南卷)某同学将质粒DNA进行限制酶酶切时，发现DNA完全没有被酶切，分析可能的原因并提出解决方法。下列叙述错误的是()

A．限制酶失活，更换新的限制酶

B．酶切条件不合适，调整反应条件如温度和酶的用量等

C．质粒DNA突变导致酶识别位点缺失，更换正常质粒DNA

D．酶切位点被甲基化修饰，换用对DNA甲基化不敏感的限制酶

B[限制酶失活会使DNA完全不被酶切，此时应更换新的限制酶，A正确；酶切条件不合适通常会使切割效果下降，调整反应条件如温度和PH等，调整酶的用量没有作用，B错误；质粒DNA突变会导致限制酶识别位点缺失，进而造成限制酶无法进行切割，此时应更换为正常质粒，C正确；质粒DNA上酶切位点被甲基化修饰，会导致对DNA甲基化敏感的限制酶无法进行酶切，此时应换用对DNA甲基化不敏感的限制酶，D正确。]

2．(2024·江西卷)γ-氨基丁酸在医药等领域有重要的应用价值。利用L-谷氨酸脱羧酶(GadB)催化L-谷氨酸脱羧是高效生产γ-氨基丁酸的重要途径之一。研究人员采用如图方法将酿酒酵母S的L-谷氨酸脱羧酶基因(gadB)导入生产菌株E．coliA，构建了以L-谷氨酸钠为底物高效生产γ-氨基丁酸的菌株E．coliB。下列叙述正确的是()

A．上图表明，可以从酿酒酵母S中分离得到目的基因gadB

B．E．coliB发酵生产γ-氨基丁酸时，L-谷氨酸钠的作用是供能

C．E．coliA和E．coliB都能高效降解γ-氨基丁酸

D．可以用其他酶替代NcoⅠ和KpnⅠ构建重组质粒

A[题意显示，研究人员采用如图方法将酿酒酵母S的L-谷氨酸脱羧酶基因(gadB)导入生产菌株E．coliA，说明可以从酿酒酵母S中分离得到目的基因gadB，A正确；题意显示，用L-谷氨酸脱羧酶(GadB)催化L-谷氨酸脱羧是高效生产γ-氨基丁酸的重要途径之一，E．coliB中能表达L-谷氨酸脱羧酶(GadB)，因此可用E．coliB发酵生产γ-氨基丁酸，该过程中L-谷氨酸钠的作用不是供能，B错误；将目的基因(gadB)导入菌株E．coliA构建高效生产γ-氨基丁酸的菌株E．coliB，E．coliA和E．coliB均不能高效降解γ-氨基丁酸，C错误；据题中信息无法推断出是否有其他酶能够替代NcoⅠ和KpnⅠ构建重组质粒，D错误。]

3．(2024·山东卷)关于“DNA的粗提取与鉴定”实验，下列说法正确的是()

A．整个提取过程中可以不使用离心机

B．研磨液在4℃冰箱中放置几分钟后，应充分摇匀再倒入烧杯中

C．鉴定过程中DNA双螺旋结构不发生改变

D．仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰

A[在“DNA的粗提取与鉴定”实验中，可将获得的研磨液用纱布过滤后，在4℃的冰箱中放置几分钟，再取上清液，也可以直接将研磨液用离心机进行离心后取上清液，A正确；研磨液在4℃冰箱中放置几分钟后，DNA在上清液中，应取上清液倒入烧杯中，B错误；鉴定过程中用沸水浴加热，DNA双螺旋结构会发生改变，C错误，仅设置一个对照组可以排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰，D错误。]

判断与表达

(1)PCR技术中，提高复性的温度能有效减少反应非特异条带的产生。(2021·湖北卷T16) (√)

(2)基因工程中常用噬菌体转化植物细胞。(2021·辽宁卷T3) (×)

提示：基因工程中常用农杆菌转化植物细胞。

(3)利用蛋白质工程技术在N0(腈水合酶)的α和β亚基之间加入一段连接肽，可获得热稳定的融合型腈水合酶(N1)，加入连接肽需要通过改造基因实现。(2021·辽宁卷T14) (√)

(4)粗提取