第三节非细胞型微生物病毒广东科贸职业11课件.ppt

*广东科贸职业学院致死率最高的三种超级病毒*广东科贸职业学院*第三节非细胞型微生物-病毒*广东科贸职业学院*病毒的一般特性1.病毒的类群2.病毒的增殖（噬菌体）3.亚病毒4.主要内容*广东科贸职业学院*二、噬菌体病毒种类很多，根据病毒寄生的对象来分，有植物病毒、动物病毒和微生物病毒。噬菌体：是病毒中的一种，一般把侵染细菌、放线菌的病毒叫噬菌体。（把侵染真菌的病毒叫噬真菌体）噬菌体在自然界广泛存在，在1995年发表的ICTV的病毒分类与命名第六次报告中共报道了4000余种，分别划归为49个病毒科.*广东科贸职业学院*不同的噬菌体示意图*广东科贸职业学院*1、组成：主要由蛋白质和核酸组成。2、基本形态：蝌蚪形、微球形和纤丝形。（一）噬菌体的形态结构与组成*广东科贸职业学院*大肠杆菌T4噬菌体构造2、蝌蚪形噬菌体的构造以大肠杆菌T4噬菌体为例廿面体对称结构，由蛋白质衣壳构成，内含一条DNA薄盘状，附颈须长95nm,衣壳粒螺旋对称；可伸缩。中空，DNA可由此进入细胞基板:六角形盘状物，其上有刺突、尾丝。刺突:有吸附功能有识别吸附功能*广东科贸职业学院*噬菌体(phage)的繁殖噬菌体并没有个体的生长过程，而只有其基本成分的合成和装配，即首先将各个部件合成出来，然后装配，所以一般将噬菌体的繁殖称做复制。根据噬菌体与宿主的关系：烈性噬菌体：指感染宿主细胞后，能够使宿主细胞裂解的噬菌体.温和噬菌体（或溶源性噬菌体）：噬菌体感染细胞后，将其核酸整合（附着）到宿主的核DNA上，并且可以随宿主DNA的复制而进行同步复制，在一般情况下，不引起寄主细胞裂解的噬菌体。*广东科贸职业学院*烈性噬菌体的繁殖过程一般分为五个阶段：即吸附、侵入、复制、装配和释放。1、烈性噬菌体的繁殖*广东科贸职业学院*吸附：噬菌体和宿主细胞上的特异性吸附部位进行特异性结合，噬菌体以尾丝牢固吸附在受体上后，靠刺突“钉”在细胞表面上侵入：核酸注入细胞的过程。噬菌体尾部所含酶类物质可使细胞壁产生一些小孔，然后尾鞘收缩，尾髓刺入细胞壁，并将核酸注入细胞内，蛋白质外壳留在细胞外复制：包括核酸的复制和蛋白质合成。噬菌体核酸进入宿主细胞后，会控制宿主细胞的合成系统，然后以噬菌体核酸中的指令合成噬菌体所需的核酸和蛋白质*广东科贸职业学院*装配DNA分子的缩合——通过衣壳包裹DNA而形成头部尾丝及尾部的其它部件独立装配完成头部与尾部相结合最后装上尾丝至此，一个个成熟的形状、大小相同的噬菌体装配完成*广东科贸职业学院*释放裂解：多以裂解细胞的方式释放分泌：噬菌体穿出细胞，细胞并不裂解通常情况下，一个噬菌体通过上述五个过程能合成100——300个噬菌体。烈性噬菌体的这种生长繁殖方式也称为一步生长方式*广东科贸职业学院*噬菌体的检测由于噬菌体的宿主细胞通常容易培养，因此噬菌体的检测也相对容易。测定的原理是根据噬菌体反复浸染，裂解宿主细胞后在固体平板上可形成噬菌斑，在液体培养基中可使菌液由混浊变澄清的特性，对噬菌体进行定性或定量分析。下面介绍三种检测噬菌体的常用方法*广东科贸职业学院*载片快速检测法噬菌体和敏感细胞与适量琼脂充分混合涂布在无菌载玻片上短期培养镜检缺点：准确性比较差*广东科贸职业学院*在无菌平皿内倒入约10ml适合宿主细胞生长的琼脂培养基待凝固成平板后，再将含1%的琼脂培养基约4ml融化并冷却至45～48℃时加入0.2ml对数期的宿主细菌液（每ml约含108个细菌）和待测噬菌体的稀释悬液0.1ml，充分混匀后，立即倒入底层平板上使之铺匀待凝固后，在37℃下倒置培养18～24h后便能在平板上看见噬菌斑。*广东科贸职业学院*单层平板法与双层平板法相比，省去了底层平板，但所用培养基浓度搞，加的量也多。缺点：由于全部噬菌斑不在同一个平面上，彼此重叠，实验效果较差*广东科贸职业学院*一步生长曲线实验设计依据：1个菌体被1个噬菌体感染,避免二次吸附；细菌群体被噬菌体同步感染。实验过程:敏感菌10mlPhage1ml混匀，5min,使之吸附离心或用抗phage血清处理,去除过量phage高倍稀释,吸附phage的菌悬液(避免多次吸附)37℃培养,定时取样