微生物限度检查法51课件.pptx

微生物限度检查法

微生物限度检查法1.各种非规定灭菌制剂应进行微生物限度检查法；2.无菌制剂应依法进行无菌检查；3.静脉滴注用注射剂应进行无菌、热原及细菌内毒素检查。《中国药典》规定：

微生物限度检查法微生物限度检查法系微生物限度检查法系检查非无菌制剂及其原辅料受到微生物污染程度的方法。检查项目1．微生物计数（需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数）2．控制菌检查（包括耐胆盐革兰阴性菌、大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌以及白念珠菌等）

微生物限度检查法一、微生物限度检验原则（一）微生物限度检查的环境1．洁净度不低于D级背景下的B级单向流空气区域内进行；2．检验过程严格无菌操作；3．严防第二次污染。课堂互动探讨中国药品生产洁净级别及其标准要求。

微生物限度检查法一、微生物限度检验原则（二）供试品抽样、保存及检验量1．按批号随机抽样，抽样量为检验用量的3倍。每批抽样应至少含有2个以上最小包装单位。2．检验量系指每次检验所需的供试品量(g、ml或cm2)。3．固体和半固体制剂的检验量为10g；液体制剂10ml。4．膜剂为100cm2(不得少于4片)。5．贵重药品、微量包装药品的检验量可酌减。要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加20g或20ml。

微生物限度检查法（三）供试液的制备采用规定的适宜方法制备1．水溶性供试品2．水不溶性非油脂类供试品3．油脂类供试品4．需用特殊方法制备的供试品5．具抑菌活性供试品

微生物限度检查法（四）检验条件培养温度：需氧菌及控制菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为20～25℃。阴性对照：以确定无菌技术的可靠性；阳性对照：检查供试品对控制菌生长有无干扰，培养条件是否适宜。

微生物限度检查法二、微生物计数法（一）计数培养基的适用性检查（二）计数方法的验证（三）检查方法（四）注意事项

微生物限度检查法（一）计数培养基的适用性检查计数用培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基以及沙氏葡萄糖液体培养基。对照培养基：系指培养基处方特别制备、质量优良的培养基，由中国药品生物制品鉴定所研制及分发。检查方法：通过检验用培养基与对照培养基的比较，以阳性菌的生长状态或特征来评价检验用培养基是否符合检验要求。二、微生物计数法

微生物限度检查法二、微生物计数法（一）计数培养基的适用性检查1.菌种（5种）传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代）

微生物限度检查法二、微生物计数法（一）计数培养基的适用性检查2.菌液制备接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌及枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基中，培养18～24小时。接种白念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基中，培养2～3天。上述培养基用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu（“Colonyformingunits”的缩写，菌落形成单位，代表含有的菌落数）的菌悬液。

微生物限度检查法（一）计数培养基的适用性检查2.菌液制备接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基中，培养5～7天，加入3～5ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后吸出孢子悬液至无菌试管中，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液。二、微生物计数法菌液保存制备好的菌液以当天使用为宜。若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。

微生物限度检查法（一）计数培养基的适用性检查3.适用性检查取上述5种菌液各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板。取白念珠菌、黑曲霉各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基平板。需氧菌培养不超过3天，酵母菌和霉菌培养不超过5天。每株试验菌平行制备2管或2个平皿。用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

微生物限度检查法（一）计数培养基的适用性检查4.结果判断同时满足以下两个条件可判定培养基的适用性检查符合规定：①被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5～2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；②被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。

微生物限度检查法（一）计数培养基的适用性检查4.结果判断同时满足以下两个条件可判定培