核酸检测实验室建立与应用.pptxVIP

2025/6/261核酸检测实验室建立与应用卫生部临检中心深圳市血液中心血液病毒核酸检测联合实验室叶贤林

核酸扩增检测实验室的建立2025/6/262人员场地检测方法选择实施方案依据：卫生部颁发的《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10号）

核酸实验室人员要求2025/6/263资质:经过临检中心PCR培训班培训并取得上岗证；通过血站核酸实验室岗前培训考试合格。培训:①无”核酸”的概念形成,②防污染的概念③良好工作习惯的培养.④报告的正确发放.后备人员的培养.010302

样本离心交接区2025/6/264试剂准备区标本制备区核酸实验场地扩增区及扩增产物分析区报告发放区

方法选择:TMA与PCR2025/6/265TMAPCR扩增原理模拟自然DNA转录成mRNA的过程模拟自然DNA复制的过程靶目标RNADNA酶MMLV逆转录酶及T7RNA聚合酶DNA聚合酶反应体系两种酶，两条引物，dNTP,NTP一种酶，一对引物，dNTP温度条件恒温（41.5℃）循环导热（变性，退火，延伸）扩增仪器水浴箱或者加热块热循环仪扩增产物RNADNA扩增速度每个循环可以生成100-1000个复制物，在15-30分钟内可增加10亿倍复制物以2n扩增，2～3h就能将待扩目的基因扩增放大10亿倍

自动化程度高2025/6/266TMA的优点缺敏度高扩增效率高：10n不能绝对定量

易于自动化2025/6/267PCR的优点缺点01灵敏度高02扩增效率高03汇集拆分过程繁琐04拆分可减低非反应性比率05

核酸试剂质控2025/6/268试剂的确认01试剂运输过程的控制(温度\条件\时限)02灵敏度的要求03内标的要求试剂涵盖的基因型04

检测流程(1):常规筛查合格汇集标本检测流程

检测流程(2):常规筛查合格单人份标本检测流程

检测流程(3):平行检测流程2025/6/2611样本清点交接核酸单份检测常规检测合格标本不合格标本阴性标本反应性标本合格标本发布结果单项目反应性无反应性阳性或可疑结果淘汰阳性或可疑结果淘汰

标准操作规程(SOP)的编写2025/6/2612核酸实验室设置与管理规范核酸实验室标本检测流程核酸实验室岗位职责核酸实验室关键试剂管理规范核酸实验室仪器设备管理规范核酸实验室检测标本管理规范核酸实验室室间质量评价规范核酸实验室记录管理制度核酸实验室生物防护规范核酸反应性献血者追踪规程核酸实验室检测应急措施

标准操作规程(SOP)的编写2025/6/2613核酸标本离心交接操作规程核酸标本提取及汇集操作规程(科华)核酸标本扩增检测操作规程（科华）核酸标本全自动检测分析系统操作规程（CHIRON）核酸标本检测报告发布操作规程（唐山软件）核酸标本检测复检操作规程生物安全柜标准操作规程可移动紫外线灯标准操作规程低温高速离心机标准操作规程ABI7300型核酸扩增荧光检测仪标准操作规程

核酸实验室防污染措施2025/6/2614扩增产物标本之间产生的气溶胶操作人员手衣服主要的污染源020103050604

核酸实验室防污染措施2025/6/2615要有独立的空气处理系统.1各区始终处于完全分隔的状态，不能有空气的直接相通2实验室保持合理的通风3对各区内的设备、物料进行标示，专区专用；其他物品不得混用（例如：笔、纸张）4空气：试剂准备区→标本制备区→扩增区→产物分析区5试剂阳性对照储存在标本制备区6使用带滤芯的吸头7

核酸实验室防污染措施2025/6/2616使用外排式的生物安全柜01自配试剂应分装成小规格，未用完的试剂应废弃02使用次氯酸钠溶液消毒（台面、地面）03使用1mol/L的HCL溶液（吸头）04使用紫外线照射（空气和台面）05使用无水乙醇溶液（空气喷雾）06

核酸实验室污染后措施2025/6/261701实验室污染后，如何处理？02通风03次氯酸钠溶液（扩增区不宜使用）04HCL溶液（吸头）05紫外线（固定、移动）06酒精喷洒（空气）07应设计有备用实验室:如开设独立的报告发放区作为备用

内标的作用血筛核酸检测的内标的作用2025/6/2618质控整个反应。提示假阴性检测结果。监控反应的外部条件内标浓度要合适保持适度的内标失控.(0.2%)中心理念：监测全程的实验过程包含病毒核酸提取、反转录及扩增过程的效率。12

核酸试剂灵敏度评估2025/6/2619概率单位回归分析(PROBIT）用于描述剂量-反应或不同因素间的剂量-反应比较，反应结果应该是以二分类形式表达的。概率单位的回归方程为：PROBITPi=A+BXi

2025/6/2620用国际标准品稀释成不同浓度评估血液HBV核