DBS13 004-2016 食品安全地方标准 创伤弧菌检验.docxVIP

DBS13

河北省地方标准

DBS13/004—2016

食品安全地方标准

创伤弧菌检验

2016-11-28发布2017-01-01实施

河北省卫生和计划生育委员会发布

Ⅰ

DBS13/004—2016

前言

本标准按照GB/T1.1-2009规定的格式编写。

本标准附录A为规范性附录。

本标准由河北省卫生和计划生育委员会归口。

本标准于2016年11月28日首次发布。

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食品安全地方标准

创伤弧菌检验

1范围

本标准规定了水产品中创伤弧菌（Vibriovulnificus）的检验方法。

本标准适用于水产品中创伤弧菌的检验。

2设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

2.1恒温培养箱：36℃±1℃、39.5℃±0.5℃;

2.2冰箱：2℃~5℃、7℃~10℃;

2.3恒温水浴箱：45℃±1℃;

2.4均质器或无菌乳钵；

2.5天平：感量0.1g；

2.6无菌试管：18mm×180mm、15mm×100mm；

2.7无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头；

2.8无菌锥形瓶：容量250mL、500mL、1000mL；

2.9无菌培养皿：直径90mm；

2.10无菌手术剪、镊子等；

2.11全自动微生物生化鉴定系统。

3培养基和试剂

3.13％氯化钠碱性蛋白胨水：见附录A中A.1。

3.2改良纤维二糖-多粘菌素B-多粘菌素E（mCPC）琼脂：见附录A中A.2。

3.3纤维二糖-多粘菌素E（CC）琼脂：见附录A中A.3。

3.43％氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂：见附录A中A.4。

3.53％氯化钠三糖铁琼脂：见附录A中A.5。

3.6嗜盐性试验培养基：见附录A中A.6。

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3.73％氯化钠赖氨酸脱羧酶试验培养基：见附录A中A.7。

3.83％氯化钠MR-VP培养基：见附录A中A.8。

3.93％氯化钠溶液：见附录A中A.9。

3.10氧化酶试剂：见附录A中A.10。

3.11革兰氏染色液：见附录A中A.11。

3.12邻硝基酚-β-D-半乳糖苷（ONPG）试剂：见附录A中A.12。

3.13Voges-Proskauer（V-P）试剂：见附录A中A.13。

3.14生化鉴定试剂盒。

4检验程序

创伤弧菌检验程序见图1。

样品25g（mL）+225mL3%氯化钠碱性蛋白胨水

36℃±1℃,18h～24hmCPC或CC平板

39℃~40℃,18h～24h挑取可疑菌落，接种于3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂

36℃±1℃,18h～24h

筛选试验

氧化酶试验，革兰氏染色，

3%氯化钠三糖铁琼脂，嗜盐性试验

生化试验或选用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统

结果报告

图1创伤弧菌检验程序

5操作步骤

5.1样品制备

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5.1.1非冷冻样品采集后应立即置7℃~10℃冰箱保存，尽可能及早检验；冷冻样品应在45℃以下不超过15min或在2℃~5℃不超过18h解冻。

5.1.2鱼类和头足类动物取表面组织、肠或鳃。贝类取全部内容物，包括贝肉和体液。甲壳类取整个动物，或者动物的中心部分，包括肠和鳃。如为带壳贝类或甲壳类，则应先在自来水中洗刷外壳并甩干表面水分，然后以无菌操作打开外壳，按上述要求取相应部分。

5.1.3以无菌操作取样品25g（mL），加入3％氯化钠碱性蛋白胨水225mL，用旋转刀片式均质器以8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或拍击式均质器拍击1min～2min，制备成1:10的样品匀液。如无均质器，则将样品放入无菌乳钵，自225mL3％氯化钠碱性蛋白胨水中取少量稀释液加入无菌乳钵，样品磨碎后放入500mL无菌锥形瓶，再用少量稀释液冲洗乳钵中的残留样品1～2次，洗液放入锥形瓶，最后将剩余稀释液全部放入锥形瓶，充分振荡，制备1:10的样品匀液。

5.2增菌

将上述1:10样品匀液于36℃±1℃培养18h～24h。

5.3