影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法.pptxVIP

一.影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法?

试剂1观察外包装，内主份有无漏液，注意效期等。仔细阅读说明书，严格按照试剂说明书进行操作。操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟，保证酶等液体的初始反应温度及活性剂的溶解。2

标本：1.血清或血浆标本分离不好即进行加样。不加抗凝剂（以HBsAg影响较大）。漏加样品或加样量不足的，加液器的校正。加样时间：手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(以HIV试剂较为明显。)；(2)加样过程应注意的问题

01温箱孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底；03孵育时温度不符合说明书的规定范围。02孵育时间人为延长，导致非特异性结合，难以清洗彻底。(3)孵育过程中出现的问题

0102洗板过程中易出现的几点情况采用手工洗板,孔与孔之间液体容易交叉，切不可随意洗板。采用洗板机洗板时，洗液注入孔中量不足，导致洗板不彻底，造成本底高。由于血液中纤维原蛋白，造成洗板针堵塞，抽吸不完全，造成洗板不畅，导致洗板效果差，直接影响本底。反应板过多，不能保证及时洗板，造成洗板等待时间过长，影响结果。洗板前先将孔内液体甩出包被板。

显色剂配制后放置时间过长或使用已经变色失效的显色剂；用排枪加A、B混合液时，加样槽不够干净，造成花板。不同厂家试剂的显色液混用。(5)显色过程中易出现的问题

加完终止后30分钟内读取数据。1读板时板底如果不清洁，就会导致所读的数据不准确，所以在读数前尽量保证酶标板的底部是清洁的。2(6)终止和读数时的注意事项

二.实验完成后异常结果出现的原因分析

问题1：只有单次实验出现灵敏度偏低或者偏高。处理意见：重新实验，并在实验中注意试剂盒的温度平衡、温育的时间、显色的时间等影响因素的控制。

问题2：质控品漏检处理意见：检查质控品是否有反复冻融的情况、质控品是否有批内差异、质控品是否为4摄氏度久置。

logo问题3：日常使用中出现弱阳性标本漏检。处理意见：A标本本身由于各种因素影响而表现为弱阳性，实际上为阴性标本。B由于标本自身含量较低，易随实验水平位试剂盒调整等因素波动，对这部份标本的处理应格外慎重，有条件的地区应进行确证实验。

01处理意见：C注意检查实验中所用的仪器设备02是否定期校准。03D注意检查实验中所用的板、酶标04试剂的批号是否相同，不同批号05试剂不得混用。

质控品灵敏度偏高。处理意见：卫生部临检中心的质控品存在批间批内差异。实验室相关条件改变导致质控变化，看阳性对照品是否有明显变化。

问题5：多次实验灵敏度一直偏低。处理意见：A保存环境不规范。B孵箱温度不足。C温育时间不足。

单次实验中出现假阳性A处理意见：注意实验过程中的影响因素，特别是实验中的洗板应设置浸泡B30---60秒时间。C

问题7：临床实验中出现假阳性偏高。处理意见：A注意检查洗涤液中结晶部份是否完全溶解。B注意检查实验中所使用的仪器设备是否定期校准。C注意检查实验中所用的板、酶标试剂的批号是否相同，不同批号试剂不得混用。

处理意见：D假阳性标本表现在临界值附近较多，通常与当时实验的水平有关，注意检查实验条件的波动。E避免加样时间过长。F由于试剂盒灵敏度过高而造成临床假阳性偏高的结果。

问题8：多次实验重复性差。处理意见：A加样后充分混均。B尽可能使用同一加样器，装紧枪头。C测量波长保持一致。D加样量、加试剂量保持一致。

三.血型常见问题分析1.关于效价的问题：目前公司内部质量规程规定A,B细胞均需达到1：128O细胞需达到1：8。2.关于凝集的问题：A,B细胞1：128+O细胞1：8+此处的“+”为肉眼可见清晰的凝集颗粒。3.关于变色及溶血的问题：①当细胞近效期时，有可能出现细胞浊液颜色发暗红，属正常现象。②正常细胞沉淀后，颜色鲜红色，摇匀后细胞浊液颜色鲜红。③当细胞受污染或细胞破碎，细胞沉淀后颜色暗红甚至发黑。细胞浊液暗红或发黑。当细胞本身衰老或破碎后，有可能引起效价偏低，凝集不实。