项目八-药物的体外抗菌技术-2.pptVIP

药物的体外抗菌技术;学习目标;药物的体外抗菌试验：又称药敏试验，是为了检查药物的抗菌能力，主要用于筛选抗菌药物或测定细菌对药物的敏感性。

;药物的体外抗菌试验;优点：方法简便、需时短、用药量少，不需要动物。

缺点：不能根据体外试验结果肯定或否认一个药物的抗菌作用。;抗菌试验的影响因素;所用的试验菌株应处于对数生长期，因此期的微生物对外界因素变化最敏感。

试验结果的灵敏度在一定程度上与试验菌的接种量成反比关系，故应选用适宜的接种量。;抗菌试验的影响因素;抗菌试验的影响因素;抗菌试验的影响因素;在实际工作中，往往可见到体外实验有作用的药物，进入机体后由于各种原因而失效，有的药物毒性很大也不能用于临床。;常用的体外抑菌试验;琼脂扩散法;纸片扩散法：

制成含菌平板后，将滤纸片蘸取药液置于平板上，培养后观察结果，量取抑菌圈直径以此判断试验药物抑菌作用的强弱。

最常用的方法，适用于多种药物或一种药物的不同浓度对同一试验菌的抑菌试验，多用于新药的初筛及临床的药敏试验。;(二)培养基和抗菌药物纸片;试验程序;1.用接种环分别在琼脂平板上挑取形态相似的大肠杆菌菌落4～5个，接种于3～5mL肉汤管中

2.35℃温箱培养2～8h，与标准比浊管比较，假设菌液浓度太浓时，可用肉汤或生理盐水稀释至与0.5麦氏标准比浊管浊度相同

3.在15min内，用无菌棉签蘸取菌液，并在管壁上挤去多余的菌液后涂布于M-H琼脂平板上〔注意：涂布要均匀、致密〕，待干;4.用镊子蘸取95%乙醇并通过火焰，待烧干后再蘸取乙醇重复上述操作，共三次即可到达灭菌的效果。待冷却后，用此无菌镊子夹取不同药敏纸片，按一定间隔贴在平板的不同区域，即两纸片间距不小于24mm，纸片距平板边缘不小于15mm。

5.35℃温箱培养18～24h观察结果。;纸片法的原理;〔四〕结果判断和报告

用精确度为1mm的游标卡尺量取抑菌圈直径。根据NCCLS标准，作出“敏感”、“耐药”和“中介”的判断。;〔五〕药物敏感试验结果解释;挖沟法：

1、在琼脂平板上挖沟，沟两边垂直划线接种各种试验菌，沟内参加药液。

2、培养后，根据沟两边所生长的试验菌离沟的距离来判断药物对试验菌的抗菌作用强弱。

适用于在一个平板上试验一种药物对几种不同试验菌的抗菌作用。;;琼脂扩散法具有方法简便，技术要求不高，易掌握操作的特点。但精确度不高，一般能用于定性或初步判断其作用的强弱。

液体稀释法是一种测定药物的抗菌作用定量方法，较琼脂扩散法精确，因而运用较普遍。;凡能抑制试验菌生长的最高药物稀释度为该药的最低抑菌浓度〔Minimalinhibitoryconcentration，MIC〕。

以培养后无细菌生长的最高药物稀释度为最小杀菌浓度〔Minimalbactericidalconcentration，MBC〕。;液体连续稀释法

;MIC及MBC的测定;在测定中草药煎剂时，由于有些煎剂颜色较深，肉眼不易分辨是否有效；需再于每管中取数环移种于适当的培养基上，经培养后观察有无细菌生长而决定之。;体外杀菌试验技术;体外杀菌试验技术;联合抗菌试验技术;纸条实验法