功能性饮料中维生素 B12 的测定液相色谱-质谱_质谱法.pdfVIP

ICS67.160.10

X62TB

团体标准

T/NAIA×××-××××

T/NAIA026—2021

功能性饮料中维生素B12的测定

液相色谱-质谱/质谱法

(征求意见稿)

××××-××-××发布××××-××-××实施

宁夏化学分析测试协会发布

发布

功能性饮料中维生素B12的测定

液相色谱-质谱/质谱法

1范围

本标准规定了功能性饮料中维生素B12的测定方法

本标准适用于功能性饮料食品中维生素B12的测定

本方法功能性饮料取样量为50gl时，方法检出限为3.0ug/kg。

2原理

采用VB12免疫亲和和液相色谱-质谱法对试样提取液中维生素B12进行富集并去除部分杂

质超高效液相色谱-质谱/质谱法分析。

3试剂

除另有规定外，均要求试剂为分析纯试剂。实验室用水均为一级水，电导率25摄氏度时为

0.01ms/m。

3.1甲醇（色谱纯）

3.2乙酸铵（色谱纯）

3.3氢氧化钠

3.4一水合柠檬酸

3.5磷酸二氢钾

3.6乙醇

3.7磷酸缓冲液（PH6.5）：称取0.68g磷酸二氢钾，加0.1mol/l氢氧化钠15.2ml，再用水稀

释至100ml。

3.8维生素B12标准品：纯度≥99%。

3.9维生素B12标准储备液：称取维生素B12标准品10mg（精确至0.1mg），用5%乙醇溶

解，并定容至10ml棕色容量瓶中，摇匀，冷藏保存。

3.10维生素B12标准中间液：精密移取0.1ml维生素B12标准储备液于100ml容量瓶中，

用水定容至刻度，摇匀既得1ug/ml的标准中间液。

3.11维生素B12标准系列：分别精密移取一定量的维生素B12标准中间液于10ml容量瓶中，

用水定容至刻度，配成0.5、1.0、10.0、20.0、50.0、200.0ng/ml的标准系列溶液。

4仪器和设备

4.1高效液相色谱-质谱/质谱仪

4.2超声波清洗机

4.3离心机：16000r/min

4.4免疫亲和净化柱：维生素B12免疫亲和柱。

5分析步骤

5.1碳酸型功能性饮料：取150mL样液于超声波中脱气10min，待用。

5.2果粒或果汁型功能性饮料：用1mol/L氢氧化钠调pH至7.0，置离心机中以转速

4000r/min离心10min,过滤，滤液待用。

5.3称取试样50g样品于250mL容量瓶中，加人100mL水，振摇混匀，将其置于超声波清

洗器中，超声提取约15min后用水定容。（如样品溶液的pH在7.0以上，用柠檬酸调节pH

在5.0（±1）之间；如样品溶液的pH在4.5以下，则应用磷酸盐缓冲液代替水作为提取液

并重复上面步骤。

5.4富集、净化

维生素B12免疫亲和净化柱先用10mL水淋洗小柱中未键合的化合物，吸取20mL（5.3）提

取液上样到净化柱上，再用3mL甲醇洗脱维生素B12至蒸发皿中，整个过程速度约为1滴

/s。于60℃~70℃水浴中蒸干溶剂，用1ml(2+98)(甲醇+10mmol/L乙酸铵)溶液溶解，溶液过

0.45m水系滤膜，待高效液相色谱-质谱/质谱仪用。

5.3液相色谱参考分析条件

5.3.1色谱柱：C18（5mm×150mm×2.7um）反向色谱柱

5