荧光定量PCR原理及应用科研版.pptVIP

Chromo4四通道实时荧光定量基因检测系统之高分辨率可以清晰的分辨出128、256、512、1024拷贝数的初始模板量Chromo4四通道实时荧光定量基因检测系统之优越的重复性无论使用哪一个通道，无论使用非特异性的SG1或特异性的TaqMan探针，都能得到重复性极好的结果Opticon实时荧光定量PCR仪之实验结果（1）实验时间：012002年8月16日02地点：03北京红十字血液中心04试剂：05PG公司HIV及HCV试剂盒06样本：07血液中心-20度保存08Opticon实时荧光定量PCR仪之实验结果（2）实验时间：012002年8月14日02地点：03北京红十字血液中心04试剂：05PG公司HIV试剂盒06样本：07血液中心-20度保存08Opticon实时荧光定量PCR仪之实验结果（3）实验时间：2002年8月21日地点：北京大学生命科学学院试剂：PG公司HBV试剂盒样本：参控标准品Opticon实时荧光定量PCR仪之SARS试剂盒实验结果Opticon实时荧光定量PCR仪之实验结果（ERBB2检测）--解决模板提取过程中造成的差别--解决样品材料不均一造成的差别--解决加样过程中的差别双通道与内标MJR系列实时荧光定量PCR仪之准确的相对定量方法---内标法MJR系列实时荧光定量PCR仪之内标法内标法必须：在一个PCR管中进行两种PCR反应：一个是有差别的（目标RNA或DNA）一个是无差别的（内标RNA或DNA）MJR系列实时荧光定量PCR仪之内标法添加DNA或RNA03看家基因02内标的种类011实时荧光定量PCR技术之多色双通道技术2多色双通道技术：4双通道：可同时测定两种荧光染料发出的荧光3多色：可使用多种荧光染料一个PCR管内进行两种PCR扩增要解决的问题：引物及探针问题---引物及探针的相互干扰模板量差别---共用资源的相互竞争实时荧光定量PCR技术之多色双通道技术FRRQFRRQFRRQRQ实时荧光定量PCR技术之多色双通道技术1、引物及探针问题FRRQFRRQRQRQRQRQRQRQRQRQRQRQRQRQRQRQRQRQRQRQRQRQ2、共用资源的相互竞争实时荧光定量PCR技术之多色双通道技术FRRQFRRQRQRQRQRQRQRQRQRQRQRQRQRQRQRQRQRQ解决办法：单双通道同时进行，相互验证实时荧光定量PCR技术之多色双通道技术单单双实时荧光定量PCR技术之多色双通道技术解决办法之二：primerlimiting实时荧光定量PCR原理OUTLINE什么是实时荧光定量PCR荧光化学双通道与内标基因分型（SNP）检测实时荧光定量PCR的原理：FRFQCVQTCSNPG/AFQCVQTForwardprimerReverseprimerAllele-specificprobeAllele-specificprobe用TaqMan探针进行基因型分析实时荧光定量PCR技术之SNP检测-基因型分析QF5’CGQ5’3’GCFQV5’3’GTQ5’3’HybridizationofTaqManProbeDigestionofprobe-fluorescenceNOdigestionofprobe-NOfluorescenceTVQCFQMatchforAllele1ReducedEfficiencyofProbeHybridizationMismatchforAllele1Polymerase实时荧光定量PCR技术之多色双通道技术应用-基因型分析从病人血液样品中提取DNA基因型分类：A/A(Allele1)G/G(Allele2)G/A