生物技术药物质量控制 (2).pptVIP

AlamarBlue：氧化型AlamarBlue（600nm）可被活细胞中的线粒体酶还原，还原后染料（570nm）发生颜色和荧光改变，颜色和荧光的深浅与活细胞数成正比，可用分光光度计或荧光检测仪检测。Crystalviolet：染活细胞后，在比色计中测定光吸收值（A），A值与着染色细胞数成正比。第30页，共82页，星期日，2025年，2月5日 几种细胞培养测定方法比较 3H-thymidineBrdUMTT AlamarBlue 靶向物DNA合成系统 线粒体电子传递系统 检出细胞的状态增殖 增殖、生存检出法 放射活性 色素、荧光 色素 色素、荧光抽出的必要性 + ++- 其他试剂的必要性+ ++ +- 成本（以MTT为1时） 6080-100（试剂盒）1 2缺点 使用同位素 不适合检出大量未增殖检出未增浮游细胞细胞，处理时费力殖活细胞 第31页，共82页，星期日，2025年，2月5日生物学活性测定分析方法1、用能诱导50%最大反应的待测样品最高稀释度作为参考效价（或滴度），或以此稀释度中所含样品的量为1单位，即以此稀释度的倒数为待测样品所含的单位数。2、比较已知浓度或活性单位样品标准品和待测样品的实验结果。活性标准品待测样品稀释度abA值生物学测定基本模式图第32页，共82页，星期日，2025年，2月5日蛋白质药物的比活性测定的意义1、比活性：每毫克蛋白质的生物学活性单位。2、蛋白质的空间结构不能常规测定，而它的改变（如二硫键的错误配对）可影响蛋白质的生物学活性，从而影响药效，比活性可以反映此种情况。3、比活性可反映产品生产工艺的稳定情况，可比较不同表达体系、不同生产厂家生产同一产品时的质量情况。4、比活性是重组蛋白质药物不同于化学药的一项重要指标，也是进行成品分装的重要定量依据。第33页，共82页，星期日，2025年，2月5日生物活性测定标准范围确定1、使用验证过的测定和分析方法，并提供用此方法的效价测定平均值和单测定一批误差的可信限范围。2、对于成品的生物活性测定标准，要根据不同方法的特点规定相当标示量的范围，目前，生物活性的测定方法有四类：动物基础、细胞基础、生化（酶）法、特异（免疫、受体）结合法。第34页，共82页，星期日，2025年，2月5日不同生物活性测定方法的规定标准表测定方法规定标准动物基础的生物活性测定70%～130%标示量细胞基础的生物活性测定80%～120%标示量体外酶法的生物活性测定85%～115%标示量受体结合的生物活性测定85%～115%标示量第35页，共82页，星期日，2025年，2月5日生物学活性效价测定过程中

标准品的作用1、生物学活性测定变异范围大，同样制品在不同实验室测定结果差异很大，必须有一个统一的标准。2、标准品的使用，最大限度地减少实验室之间和各种影响测定因素地干扰。第36页，共82页，星期日，2025年，