明胶中猪源性成分鉴定 液相色谱-质谱质谱法.docxVIP

明胶中猪源性成分鉴定液相色谱-质谱/质谱法

SN/T5654-2024

表1梯度洗脱程序

时间min

A%

B%

0.0

5.0

95.0

2.0

5.0

95.0

7.0

60.0

40.0

8.0

60.0

40.0

8.1

5.0

95.0

10.0

5.0

95.0

8.3.2质谱条件

质谱条件如下：

a)电离方式：电喷雾电离，正离子。

b)扫描方式：多反应监测(MRM)。

c)电喷雾电压：3000V。

d)离子源温度：350℃。

e)脱溶剂管温度：150℃。D雾化气：氮气，63mL/min.

g)加热气：空气，14mL/min.

h)干燥气：氮气，6mL/min.

8.4定性测定

在相同使用条件下，按照液相色谱-串联质谱条件测定猪明胶的标准工作溶液，同时测定样品溶液。样品中目标物色谱峰的保留时间与标准溶液色谱峰的保留时间相比较，变化范围应在±2.5%以内，且样品中所选择的肽段出现≥3个，肽段对应的离子出现≥3对(见附录A)。样品中待测物的质谱定性离子与定量离子的比例应当与浓度相当标准工作溶液的相对离子比例一致，相对离子比例允许偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在日标待测物。

表2定性确证时相对离子比例的最大允许偏差

相对离子比例%

50

20-50

10-20

≤10

允许的相对偏差%

士20

士25

士30

士50

8.5定量测定

以标准工作溶液浓度为横坐标，以肽段GETGPAGPAGPVGPVGAR的定量离子对的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，按外标法计算试样中猪源性成分的含量。标准工作液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应范围内。在上述色谱-质谱条件下，猪明胶标准工作溶液特征肽段的提取离子色

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谱图见附录B。

8.6空白试验

除不称取试样外，按上述试样测定步骤进行。

9结果计算和表述

试样中猪源性明胶的含量由色谱数据处理软件或按公式(1)计算获得：

……(1)

式中：

X——试样中被测组分的含量，单位为毫克每千克(mg/kg):

c——从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);

v——样品定容体积，单位为毫升(mL);m——样品称样量，单位为克(g)。

注：计算结果需扣除空白值。结果保留两位有效数字。

10精密度

在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值，不应超过算术平均值的15%。

11检出限、定量限和回收率

11.1检出限、定量限

本方法的检出限为0.15mg/kg,定量限为0.5mg/kg。

11.2回收率

不同明胶基质中灞加浓度木平下的回收率和精密度见附录C。

肽段序列

保留时间min

母离子m/z

子离子m/z

碰撞能

(CE)

eV

GETGPAGPAGPVGPVGAR(al)

4.62

773.9

1034.6

31.4

977.6

33.4

809.5

34.4

752.4

33.4

GPTGPAGVRCa2)

3.67

406.2

657.4

18.7

556.3

19.7

499.3

19.7

402.2

23.7

GPPGPSGISGPPGPPGPAGK(a2)

4.79

897.5

429.2

36.4

519.3

39.4

606.3

43.4

663.3

38.4

TGETGASGPPGFAGEK(22)

4.36

731.8

1074.5

25.8

946.5

27.8

859.4

25.8

802.4

31.8

注，al为工型胶原蛋白al链，a2为1型胶原蛋白a2链：为定量子离子。

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附录B(资料性)

明胶中猪源性成分特征肽多反应监测(MRM)色谱图

lmsitsn1.5×103-1.0×10-5.0×10°-

lmsitsn

0.0+0

24

2

Tinemin

GETGPAGPAGPVGPVGAR778.9977.6

6810

图B.1明胶中猪源性成分特征肽GETGPAGPAGPVGPVGAR(m/z773.9+→977.6+)的

多反应监测(MRMD色语图

8×10Txna6xi2

s

s和

4×1023x1022x12

I×

0+0

a

2

46

Tincmin

GPTGPAGVR406.2556.3

810

图B.2明胶中