荧光实时定量PCR技术FluorescencerealtimePCRtechnology讲解.pptxVIP

荧光实时定量PCR技术Fluorescencereal-timePCRtechnologyGuangdongFoodandDrugVocationalCollege广东食品药品职业学院刘戈飞老师LiuGefei

技术优势Technologicaladvantages03技术原理Technicalprinciple01目录Contents技术挑战与展望Technicalchallengesandprospects05实验流程Experimentalprocedure04技术应用Technologyapplication02

技术原理PART01

通过反复的变性、退火和延伸步骤，PCR技术能够指数级扩增特定DNA序列。DNA的热循环扩增荧光实时定量PCR利用荧光探针实时监测扩增过程，确保结果的准确性和重复性。荧光探针的应用通过比较样本与标准品的荧光信号强度，实时定量PCR可以精确测定DNA模板的初始浓度。定量分析的实现PCR技术概述

荧光实时定量PCR中，荧光染料与DNA分子特异性结合，通过荧光信号的强度来监测扩增过程。荧光染料的结合01使用特异性荧光探针，当探针与目标序列结合时，荧光信号增强，指示PCR反应的进行。探针的荧光信号变化02通过分析荧光信号随温度变化的熔解曲线，可以鉴定PCR产物的特异性和纯度。熔解曲线分析03荧光标记原理

利用已知浓度的标准品制作标准曲线，通过曲线计算出未知样本中目标DNA的初始浓度。通过设定一个固定的荧光信号阈值，确定每个样本的Ct值，即达到该阈值所需的循环次数。在PCR循环中，荧光探针或染料与目标DNA结合，产生与DNA量成正比的荧光信号。定量分析机制荧光信号的产生阈值循环的确定标准曲线的构建

技术应用PART02

细菌感染的鉴定病毒性疾病的诊断实时荧光定量PCR技术在流感、HIV等病毒性疾病的诊断中发挥关键作用，提供快速准确的结果。该技术能够快速鉴定出特定细菌，如结核分枝杆菌，从而指导临床合理用药，提高治疗效果。耐药性基因的检测通过检测病原体中的耐药性基因，实时荧光定量PCR技术帮助医生选择最合适的抗生素治疗方案。病原体检测

实时定量PCR技术在疾病诊断中用于检测特定基因的表达水平，如癌症标志物的定量分析。疾病诊断该技术帮助研究人员监测药物对特定基因表达的影响，加速新药的开发和疗效评估。药物研发通过分析基因表达，科学家能够研究遗传性疾病的分子机制，为治疗提供理论基础。遗传性疾病研究基因表达分析

产前遗传筛查基因突变检测0103利用荧光实时定量PCR技术进行产前筛查，可以早期发现胎儿的遗传性疾病风险。实时定量PCR技术可以准确检测基因中的突变位点，用于诊断如囊性纤维化等遗传性疾病。02通过分析特定基因的表达水平，该技术有助于评估个体对某些遗传性疾病的易感性。疾病易感性评估遗传性疾病诊断

技术优势PART03

利用特异性探针和引物，荧光实时定量PCR技术可以高特异性地识别目标序列，减少非特异性扩增。高特异性识别该技术具有宽广的动态范围，能够准确量化高至数百万拷贝，低至单拷贝的核酸模板。动态范围宽广荧光实时定量PCR技术能够检测到极低浓度的核酸样本，实现对微量病原体的早期诊断。检测微量核酸高灵敏度

实时定量PCR技术能够检测到极低浓度的核酸，实现对病原体的早期发现。高灵敏度检测实时监测反应过程，允许研究者在扩增过程中实时收集数据，优化实验设计。实时数据获取该技术可同时定量高至百万倍差异的核酸模板，适用于不同浓度样本的分析。动态范围宽广实时监测特性

荧光实时定量PCR技术能够检测极低拷贝数的DNA，实现高灵敏度的定量分析。高灵敏度检测该技术可对样本中的核酸进行宽动态范围的定量，覆盖从几个拷贝到数百万拷贝的检测。动态范围宽广由于实时监测反应过程，荧光定量PCR技术能够提供高度一致和重复性好的定量结果。重复性好精确的定量结果

实验流程PART04

核酸提取从组织或细胞中提取DNA或RNA，确保样本纯度和完整性，为后续PCR反应做准备。引物设计根据目标基因序列设计特异性引物，以确保荧光实时定量PCR的特异性和灵敏度。对照样本制备制备阳性对照和阴性对照样本，用于实验过程中的质量控制和结果验证。样本准备

在高温下，双链DNA解链成单链，为后续的引物结合做准备。变性步骤温度降低，引物与目标DNA序列特异性结合，为DNA聚合酶提供起始点。退火步骤DNA聚合酶在引物的引导下，沿模板链合成新的DNA链，完成一个扩增周期。延伸步骤PCR扩增过程

代谢组学是研究生物体内所有代谢物的集合，通过分析代谢物的变化来理解生物过程。设定适当的阈值，计算每个样本的Ct值，以评估目标基因的初始拷贝数。通过熔解曲线分析，验证PCR产物的特异性和纯度，排除非特异性扩增和引物二聚体的干扰。代