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红肉火龙果液泡转化酶基因HpVIN1的克隆、表达和酶活性鉴定
目录
红肉火龙果液泡转化酶基因HpVIN1的克隆、表达和酶活性鉴定（1）
一、内容综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
1.2研究目的与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5
二、材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6
2.1基因克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7
2.1.1样品采集与保存．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7
2.1.2核酸提取．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8
2.1.3基因克隆策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9
2.2表达载体构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10
2.2.1转化载体选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11
2.2.2构建策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12
2.3酶活性鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13
2.3.1酶活性的基本原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14
2.3.2鉴定方法与步骤．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15
三、结果与讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16
3.1基因克隆结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17
3.1.1序列比对与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18
3.1.2基因结构与功能预测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19
3.2表达载体构建结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21
3.2.1转化效率评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22
3.2.2表达载体的稳定性检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23
3.3酶活性鉴定结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24
3.3.1酶活性的定量分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25
3.3.2酶活性影响因素探讨．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25
四、结论与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26
4.1研究结论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27
4.2未来研究方向．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28
红肉火龙果液泡转化酶基因HpVIN1的克隆、表达和酶活性鉴定（2）
一、内容描述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29
二、材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30
火龙果样品采集与处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31
基因克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32
（1）总RNA提取及反转录．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33
（2）PCR扩增及序列分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34
基因表达．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35
（1）表达载体的构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36
（2）转化宿主细
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