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短串联重复序列基因分型法鉴定人源细胞系技术规范

1范围

本规范规定了基于短串联重复序列（STR）基因分型技术的人源细胞系鉴定的受检样本获取、样本运输、实验室工作程序、检测报告、受检对象资料和样本保存、质量控制等方面的规范要求。

本规范适用于生命科学研究等领域所涉及的不同个体来源的人源细胞系鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有修改单）适用于本文件。

GB/T1.1-2009标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写

GB19489-2008实验室生物安全通用要求

GB/T22278-2008良好实验室规范原则

GB/T27025-2008检测和校准实验室能力的通用要求

SZDB/Z124-2015基于第二代测序技术的HLA高分辨分型检测标准

ANSI/ATCCASN-0002-2011AuthenticationofHumanCellLines:StandardizationofSTRProfiling

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

细胞系CellLine

指由原代细胞群经系列传代培养获得的细胞群。该细胞群通常是非均质的，且具有明确的特性，可供建库用。

3.2

短串联重复序列ShortTandemRepeats

指重复序列为2到5个碱基对，重复次数为5~50次，且不同的重复序列以相邻形式排列的基因片段。

3.3

交叉污染Cross-contamination

指细胞在采集、扩增、传代等过程中，不同个体来源的人源细胞系之间发生的相互污染。

3.4

基因分型Genotyping

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指利用生物学检测方法测定个体DNA序列，并将其与其他个体的DNA序列或参考DNA序列进行比对，以确定该个体与其他个体的遗传组成（基因型）差异的过程。

3.5

DNALadder

指细胞凋亡时DNA在核小体间断裂形成的一些DNA片断，经过提取和纯化后在凝胶电泳上产生n条带，由于这些DNA条带经染色并成像之后的整体类似于梯子上的一个个踩踏板，故称之为DNA阶梯（DNALadder），作为比对DNA片段大小的标准品。

4缩略语

下列缩略语适合于本规范。

ATCC：美国模式培养物保藏所（AmericanTypeCultureCollection）DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）

DSMZ：德国微生物菌种保藏中心（DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturen）

JCRB：日本JCRB细胞库（JapaneseCollectionofResearchBioresourcesCellBank）NIST：美国国家标准与技术研究院（NationalInstituteofStandardsandTechnology）OD：光密度（OpticalDensity）

PBS：磷酸盐缓冲液（PhosphateBufferSolution）

PCR：聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction）

STR：短串联重复序列（ShortTandemRepeats）

5受检样本及信息获取

5.1细胞样本获取

5.1.1贴壁培养细胞样本收集

a)移去细胞培养基，加入无钙、镁离子的PBS轻摇细胞，去掉PBS；

b)加入能够完全覆盖细胞的分离缓冲液并轻微晃动直到细胞完全分离；

c)加入适量完全培养基轻微晃动混匀，转移细胞悬液至离心管中；

d)离心，去掉上清液，加入适量无钙、镁离子PBS清洗细胞；

e)离心，去掉上清液，收集细胞并检测细胞数量。

5.1.2悬浮培养细胞样本收集

a)转移细胞悬浮液至无菌离心管中；

b)离心，去掉上清液，加入适量无钙、镁离子PBS清洗细胞；

c)离心，去掉上清液，收集细胞并检测细胞数量。

5.1.3细胞样本质量要求：细胞样本的细胞数量不低于1×106个。

5.1.4细胞样本包装：使用1mL无钙、镁离子的PBS重悬细胞，保存于2mL细胞冻存管中，采用石蜡封口膜密封，于管壁上粘贴唯一编号标签。保存管应完好，无裂管、开盖等泄漏或样本外溢情况。

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5.2细胞基因组DNA样本获取

5.2.1DNA样本质量要求：基因组DNA总体积≥20μL，浓度≥50ng/μL，吸光度A260/A280的比值应该在1.8~2.0之间。

5.2.2DNA样本包装：基