DB34T 2515-2015 猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法.pdfVIP

ICS11.220

B41

DB34

安徽省地方标准

DB34/T2515—2015

猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法

RT-PCRassayforporcineepidemicdiarrheavirus

2015-11-10发布2015-12-10实施

安徽省质量技术监督局发布

DB34/T2515—2015

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则编写。

本标准由安徽省农业标准化委员会归口。

本标准由安徽省农业科学院畜牧兽医研究所提出。

本标准起草单位：安徽省农业科学院畜牧兽医研究所。

本标准起草人：潘孝成、张丹俊、赵瑞宏、沈学怀、周学利、胡晓苗、戴银、侯宏艳、李贺侠、张

宁、何国荣、周德权、王庆。

I

DB34/T2515—2015

猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了猪流行性腹泻病毒（porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV）RT-PCR检测方法及

其技术要求。

本标准适用于猪肠内容物、粪便以及细胞培养物中PEDV核酸的检测。

2缩略语

下列缩略语适用于本文件。

PEDV：猪流行性腹泻病毒（porcineepidemicdiarrheavirus）

PCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreaction）

RT-PCR：反转录聚合酶链式反应（reversetranscription-polymerasechainreaction）

RNA：核糖核酸（ribonucleicacid）

DEPC：焦炭酸二乙酯（diethylpyrocarbonate）

Taq酶：TaqDNA聚合酶（TaqDNApolymerase）

dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribonucleosidetriphosphate）

M-MLV：莫洛尼氏鼠白血病病毒（moloneymurineleukemiavirus）

PBS：磷酸缓冲液（phosphatebuffersolution）

TAE：Tris-乙酸电泳缓冲液（trisacetate-EDTAbuffer）

EB：溴化乙锭（ethidiumbromide）

3原理

PEDV是一种RNA病毒。

RNA反转录产生的cDNA可作为PCR模板进行扩增。

根据PEDV保守基因序列设计一对引物，在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以引物为延

伸起点，通过变性、退火和延伸，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA。

4仪器

4.1PCR仪扩增仪。

4.2台式低温高速离心机。

4.3电泳仪。

4.4凝胶成像系统。

4.5冰箱。

4.6微波炉。

4.7分析天平。

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4.8水浴锅。

4.9微量移液器。

5试剂和材料

5.1RNA抽提试剂：Trizol。

5.2氯仿、异丙醇、乙醇。

5.3M-MLV反转录酶。

5.4RNA酶抑制剂。

5.