DB34T 2410-2015 鸭坦布苏病毒抗体检测技术规程.pdfVIP

ICS11.220

B41

DB34

安徽省地方标准

DB34/T2410—2015

鸭坦布苏病毒抗体检测技术规程

TechnicalRegulationforDetectionofAntibodyagainstDuckTembusuVirus

2015-07-14发布2015-08-14实施

安徽省质量技术监督局发布

DB34/T2410—2015

前言

本标准按GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由安徽省农业委员会提出。

本标准起草单位：安徽农业大学动物科技学院、安徽省动物疫病预防与控制中心、宣城市动物疫病

预防与控制中心。

本标准主要起草人：王桂军、朱良强、耿照玉、占松鹤、刘红梅、祁克宗、程帮照、刘雪兰、徐前

明、王军、周迎春、张永宜。

I

DB34/T2410—2015

鸭坦布苏病毒抗体检测技术规程

1范围

本标准规定了应用琼脂免疫扩散技术检测鸭坦布苏病毒抗体的方法。

本标准适用于鸭坦布苏病毒的抗体检测，用于对该病的诊断、检疫和疫情监测。

2检测材料

2.1试验仪器

——电子天平（0.001g）

——微波炉

——37℃恒温培养箱

——琼脂凝胶梅花打孔器

——移液器

2.2TAE缓冲液（50×):

a)经基甲基氨基甲烷（Tris)242g

b)冰乙酸57.1mL

c)0.5mol/L乙二铵四乙酸二钠溶液（pH8.0)100mL

d)灭菌双蒸水加至1000mL

e)用时用双蒸水稀释50倍，配制成1×TAE缓冲液。

2.3标准抗原和阳性血清

鸭坦布苏病毒琼脂扩散抗原由坦布苏病毒病毒安徽分离株AH-F10株（CCTCCV201213）经甲醛灭

活制备而成。

阳性血清由坦布苏病毒病毒安徽分离株AH-F10株（CCTCCV201213）制备油佐剂灭活制剂免疫健

康鸭，分离血清制备而成。

3检测

3.1采血

用一次性注射器从待检鸭翅静脉无菌采血2ml。

3.2分离血清

静止血样，待血液凝固后，离心，分离上层血清待检。

3.3琼脂糖凝胶板的制备

1

DB34/T2410—2015

用1×TAE缓冲液配置1％琼脂糖，微波炉中煮沸溶解，冷却至60℃左右，倒入平皿（直径9cm）

中制作琼脂糖凝胶板，琼脂糖凝胶厚度约4mm，完全凝固后备用。

3.4打孔

用梅花打孔器在上述琼脂糖凝固板上打孔，孔径5mm、孔距3mm。打孔结束后，取适量1％琼脂

糖封底，以避免血样渗漏。

3.5加样

用移液器在中间孔加入DTMUV标准抗原，1号、4号孔加入阳性血清，2、3、5、6号孔加入待测

血清。每孔血清加满，不可溢出