人教版高中生物学选择性必修3生物技术与工程精品课件 第1章 发酵工程 第2节 第2课时 微生物的选择培养和计数 (4).ppt

2.下图是土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验中稀释与涂布平板的操作示意图。每个浓度至少设计4个平板,1~3为选择培养基,4为牛肉膏蛋白胨培养基,在本实验中如何探究培养基中是否有杂菌?提示:设置2个平板作为对照:不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基。3.“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中应如何统计培养基上生长的菌落数?提示:每隔24h统计一次菌落数目,选取菌落数目稳定时的记录作为结果。[归纳提升]1.统计菌落数目(1)方法:统计样品中微生物数量的方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数法。常用来统计活菌数目的方法是稀释涂布平板法。(2)统计依据:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个单菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。(3)操作①设置重复组,至少要涂布3个平板,增强实验的说服力与准确性。②为保证结果准确,一般选择菌落数为30~300的平板进行计数。若某稀释度下得到的3个平板的菌落数不满足均为30~300,则该稀释度不合格;若某稀释度下得到的3个平板上的菌落数差别很大,则说明实验存在问题,应重新进行实验。③统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。2.实验中的无菌操作(1)培养基、锥形瓶、试管、铲子、信封等,需要进行灭菌。(2)称取土壤要在酒精灯火焰附近进行。(3)稀释土壤溶液的每一步操作都要在酒精灯火焰附近进行。3.本实验的注意事项(1)在实验操作中,每个步骤都要注意无菌操作,以防培养基被污染,影响实验效果。(2)样品稀释液的最佳浓度为培养后每个平板上的菌落数均为30~300的浓度。细菌一般选104、105、106倍稀释的稀释液进行培养。(3)为排除非测试因素(培养基)的干扰,实验需设置不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基进行对照。(4)每一稀释倍数的菌液都至少要涂布3个平板,作为重复实验,求其平均值,若有的平板的菌落数与其他平板相差太大,则需要重新实验。4.计算公式:每克样品中的菌株数=(C÷V)×M。C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL),M代表稀释倍数。[典型例题]为了解鲜奶中细菌的数量,某兴趣小组尝试对某品牌鲜奶中细菌的含量进行测定。他们用无菌吸管从锥形瓶中吸取1mL鲜奶稀释液加入盛有9mL无菌水的试管中,混合均匀,如此再重复2次,操作如下图所示。请回答有关问题。(1)鲜奶常采用消毒,这种消毒方法使鲜奶的营养成分不被破坏。?(2)为了对鲜奶中的细菌进行计数,常采用法。使用该方法时,在取最终的鲜奶稀释液0.1mL滴在培养基上后,应选择下列工具中的(填序号)进行实验操作。若其中一个平板经培养后的菌落分布如图甲所示,则导致该结果的失误操作可能是。?(3)若用上述方法培养设置3个培养皿,菌落数分别为35、33、34,则可以推测每毫升鲜奶中含细菌个。运用这种方法统计的结果往往较实际值(填“偏高”或“偏低”),原因是。?(4)消毒后的鲜奶中绝大部分细菌被杀死,若继续用该方法检测消毒后的牛奶中细菌的数量,则在操作步骤上应做什么改动?。答案:(1)巴氏消毒法(2)稀释涂布平板B涂布不均匀(3)3.4×106偏低个别菌落可能是由两个或多个细菌形成的(4)稀释次数减少或稀释倍数减小解析:(1)巴氏消毒法是指在63~65℃消毒30min或72~76℃处理15s或80~85℃处理10~15s。使用这种方法对鲜牛奶进行消毒的好处是牛奶的营养成分不被破坏。(2)常用稀释涂布平板法对鲜奶中的细菌进行计数。由题图可知,图B为稀释涂布平板法中使用的涂布器。图甲中菌落分布不均匀,可能是涂布不均匀导致的。(3)根据题意可知,每毫升鲜奶中细菌的数量=(35+34+33)÷3÷0.1×104=3.4×106(个)。运用稀释涂布平板法统计时,个别菌落可能是由两个或多个细菌形成的,所以结果往往较实际值偏低。(4)消毒后的牛奶中绝大部分细菌被杀死,若继续用稀释涂布平板法检测消毒后的牛奶中细菌的数量,则在操作步骤上应减少稀释次数或减小稀释倍数。【变式训练】1.从土壤中分离分解尿素的细菌并计数,下列实验操作错误的是()A.将土壤用无菌水稀释,制备103、104、105、106倍稀释的土壤稀释液B.将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同的平板上,每个稀释度至少涂布3个平板,避免偶然性C.某稀释度下涂布的3个平板上的菌落数分别为36、220、224,则以160作为记录结果D.培养基应以尿素为唯一氮源答案:C2.在做分离能