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组织匀浆的制备

1、取组织块0.2g-1.0g，最少可到2～5mg，在冰冷的生理盐水中漂洗，除

去血液，滤纸拭干，称重，放入5或10ml的小烧杯内。

2、用移液管量取预冷的匀浆介质（ph=7.4,0.01mol/LTris-HCL,

0.0001MOL/LEDTA-2Na,0.01mol/L蔗糖0.8％的氯化钠溶液）或者用0.86％冷生

理盐水，匀浆介质或生理盐水的体积总量应该是组织块重量的9倍，用移液管或

移液器取总量的2/3的匀浆介质或生理盐水于烧杯中，将盛有组织的小烧杯放入

冰水中，用眼科小剪尽快剪碎组织块。

3、用组织捣碎机10000～15000r/min上下研磨制成10％组织匀浆，也可用

内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在冰水

中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。

超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声波发生器以振幅

14微米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用40安培，5

秒/次，间隙10秒反复3～5次。

取少量组织匀浆做涂片（直接涂片、染色均可），显微镜下观察细胞是否磨破，

若没有破则可以延长匀浆时间。

4、将制备好的10％匀浆用普通离心机或低温低速离心机3000r/min左右离心

10～15分钟，将离心好的匀浆留下上清弃下面沉淀。

根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种测定。

可溶性抗原(solubleantigen)的制备及鉴定

蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、脂多糖、细菌外毒素和核酸等均为

可溶性抗原，它们有相当部分来源于组织和细胞，成分复杂。制备这类免疫原时，

首先须将组织和细胞破碎，然后再从组织和细胞匀浆中提取目的蛋白或其他抗

原，提纯的抗原需鉴定后才能用做免疫原。

关键词：可溶性抗原可溶性抗原solubleantigen糖蛋白脂蛋白细胞匀浆

蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、脂多糖、细菌外毒素和核酸等均为

可溶性抗原，它们有相当部分来源于组织和细胞，成分复杂。制备这类免疫原时，

首先须将组织和细胞破碎，然后再从组织和细胞匀浆中提取目的蛋白或其他抗

原，提纯的抗原需鉴定后才能用做免疫原。

一、组织匀浆的制备

用于制备免疫原的材料必须是新鲜或低温保存的。材料获得后立即去除包膜

或结缔组织，脏器应进行灌洗，去除血管内残留的血液，用含0.5g/LNaN的生

3

理盐水洗去血迹及污物；在4℃水浴或冰浴中将洗净的组织剪成0.3～0.5cm3小

块，加入适量生理盐水，装入捣碎机筒内制成组织匀浆。组织匀浆经3000r/min

离心10min后，上清液作为提取可溶性抗原的材料。上清液在提取前还必须进行

离心去除细胞碎片及微小的组织。

二、细胞破碎

提取细胞的可溶性抗原，需将细胞破碎。根据细胞类型不同，选择破碎的方

法也有一定的差异，现介绍几种常用的细胞破碎方法。

1、酶处理法

溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶等在一定的条件能消化细菌和组织细胞。如溶菌

酶对革兰阳性菌的细胞壁有溶菌作用。酶处理法适用于多种微生物细胞的溶解，

该方法具有作用条件温和、内含物成分不易受到破坏、细胞壁损坏程度可以控制

等特点。

2、冻融法

细胞主要因突然冷冻，细胞内冰晶的形成及胞内外溶剂浓度突然改变而破

坏。其方法是将破碎的细胞置-15～-20℃冰箱内完全冻结，然后从冰箱取出，让

其在30～37℃中缓慢融化。如此反复两次，大部分组织细胞及细胞内的颗粒可

被破。此法适用于组织细胞，对微生物的细胞作用较差。

3、超声破碎法

这是利用超声波的机械振动而使细胞破碎的一种方法。由于超声波发生时的

空腔作用（cavitation），使液体局部减压，引发液体内