丙型肝炎病毒核酸扩增检测标准操作规程.pdf

医院检验科丙型肝炎病毒核酸扩增荧编号：SOP―×××

临床基因扩增检验实验室光定量检测标准操作程序第1页共6页

丙型肝炎病毒(HCV)核酸扩增(PCR)

荧光定量检测标准操作程序

一、目的：明确丙肝病毒核酸定量检测的操作规程，指导检验人员正确进行

丙肝病毒核酸定量的检测,保证检测结果及时可靠。

二、范围：适用于进行丙肝病毒核酸定量检测的检验人员。

三、职责：实验操作人员应严格按操作规程进行实验。

四、检测原理：本试剂盒从血清或血浆中提取HCVRNA，在逆转录酶作用下

将RNA逆转录为HCVcDNA，在引物的指导下，以四种脱氧核苷酸为

底物，通过耐热DNA聚合酶的酶促作用，对cDNA进行体外扩增，用

Taqman探针法检测扩增产物。通过标准曲线，即可计算出被检物的

含量。

五、试剂：

1.来源：上海科华生物工程股份有限公司HCV核酸扩增荧光定量检测试

剂盒〔国药准字。

2.规格：32人份/盒。

3.试剂盒组成：

3.1病毒RNA提取试剂：用于从血清或血浆中提取HCVRNA。

裂解液4ml×1瓶含有硫氰酸胍的溶液

助沉剂1瓶含有助沉剂的冻干粉末

去抑制剂1瓶含有去抑制剂的冻干粉末

洗涤液A14ml×1瓶含有硫氰酸胍的溶液

洗涤液B4ml×1瓶含有Tris的溶液

洗脱液1.8ml×2支含0.04%NaN的灭菌双蒸水

3

（无RNase）

核酸提取柱32支×1包含连接套管

编写人审核人批准人生效日期

医院检验科丙型肝炎病毒核酸扩增荧编号：SOP―×××

临床基因扩增检验实验室光定量检测标准操作程序第2页共6页

3.2核酸扩增（PCR）―荧光检测试剂：

RT―PCR试剂

PCR主反应液250ul×1支含有一对引物和dNTP的溶液

酶混合物180ul×1支含有Taq酶、逆转录酶和RNA

酶抑制剂的溶液

荧光探针20ul×1支含有荧光探针的溶液

对照品

阴性对照250ul×1支含有0.05%NaN的HCVRNA

3

阴性的混和人血清