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pH影响七彩神仙鱼蛋白酶活性的研究

PH

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论文导读::但七彩神仙鱼难于养殖。其中PH是主要影响因素。笔者对七彩神仙鱼的蛋白酶活性进行了系列研究。消化酶活性与环境因素有密切关系。

论文关键词:七彩神仙鱼,PH,蛋白酶,活性

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七彩神仙鱼(SympHysodondiscus)俗称铁饼、七彩燕,属慈鲷科(Cichidae)鱼类,是名贵的热带观赏鱼之一,它原产地为南美洲的亚马逊河流域。因其体态雍容华丽及独特的护幼和抚育行为,倍受观赏鱼爱好者的青睐,被冠为“热带观赏鱼之帝”。但七彩神仙鱼难于养殖,尤其在苗种阶段,人工饲料满足不了其需求。有关于七彩神仙鱼生物学特性、养殖和繁殖技术的研究已有一些报道,但关于七彩神仙鱼营养和生理生态方面,饲料对七彩仙鱼生长、消化吸收影响的研究报道少见。消化酶活性与环境因素有密切关系,其中PH是主要影响因素,笔者对七彩神仙鱼的蛋白酶活性进行了系列研究,期望在七彩神仙鱼饲养过程中对饵料选择、配合饵料的研制等方面有所帮助,提高七彩神仙鱼的成活率,可为研究优化观赏鱼的养殖技术提供参考。

1.材料与方法

1.1材料与样品制备

试验用的七彩神仙鱼淡水养殖,均健康无害。平均体全长12cm,体重为51.6gPH,取回后在水族箱暂养,饥饿24小时后,取鱼称重解剖,取出胃、肠(实验时分中肠和后肠),剔除附属物,剖开胃、肠,用冷却去离子水(4℃)冲洗,滤纸吸干,称重,按样品重的20倍分次加进约pH=7.0的冷却去离子水,高速捣匀,用冷冻离心机经4000r/min离心30min,取上清液于4℃冰箱保藏备用,12小时内分析完毕。

1.2标准曲线的绘制

取试管6支,标号0、1、2、3、4、5。分别向6支试管中加入0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00标准酪氨酸溶液(50μg/ml)。然后,各试管用蒸馏水补足到1.00ml,再各加0.55M碳酸钠溶液5ml,最后各管依次加入福林-酚试剂0.5ml,摇匀,置30℃恒温水浴显色15分钟,用722型分光光度计在680nm处测光吸收值。以酪蛋白的微克数为横坐标,以吸收值为纵坐标,绘制标准曲线。

图1酪蛋白标准曲线

表1酪蛋白标准曲线

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试管号

0

1

2

3

4

5

酪蛋白微克数

0

10

20

30

40

50

A(3档)

0.054

0.089

0.128

0.168

0.208

0.248

1.3蛋白酶活性测定

蛋白酶活性的测定采用福林-酚试剂法免费论文下载。先作实验组:用0.5%酪蛋白溶液2ml为底物(保持缓冲PH值为7.5),在30℃恒温水浴中预热5分钟后加入预热(30℃,5分钟)的酶液1ml,缓冲液2ml,立即计时。反应10分钟后,由水浴中取出,并立即加入10%的三氯乙酸溶液3ml,放置15分钟后,用滤纸过滤,取滤液1ml。加入0.55mol/L碳酸钠5ml,再加入福林-酚试剂1ml,30℃水浴中显色15min。另外,同时做空白对照:先取0.5%酪蛋白溶液2mlPH,缓冲液2ml,先加入3ml10%的三氯乙酸溶液,然后再加入酶液1ml,以下操作同试验组。用722型分光光度计,在波长为680nm条件下测定各自的光密度值。

在资料中显示,胃蛋白酶最适PH测定为1.5~6.5,所以对胃蛋白酶的测定时,只测定PH为2.2~6.2时的活性,设置了11个梯度;而肠蛋白酶在PH4.5~8.5,所以设置了9个梯度,测定范围为4.6~7.8的活性。

1.4蛋白酶比活力定义

蛋白酶活力单位:在30℃水浴下,粗酶液每毫克蛋白每分钟水解所产生酪氨酸的毫克数。

蛋白酶活力单位数=△O.D680/t

比活力=酶活力单位数/毫克蛋白质=△O.D680*1000/(ε*t)

式中:△O.D为样品管光密度值——空白管光密度值

ε为每个样品管中蛋白的用量(毫克)

t为保温时间(分钟)

2.结果

以PH值为2.0~8.0的0.2mol/L磷酸氢二钠—柠檬酸缓冲液分别测定胃、肠组织蛋白酶最适PH值,并测定各组织在不同PH条件下蛋白酶的活性。所得数据用Excel及SPSS软件进行处理。

表2PH对胃、肠蛋白酶活性的影响

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PH

中肠

后肠

2.2

127.8±0.114

——

——

2.6

122.8±0.11

——

——

3.0

109.4±0.071

——

——

3.4

92.2±0.084

——

——

3.8

75.5±0.13

——

——

4.2

48.5±0.084

——

——

4.6

29.4±0.071

——

——

5.0

15.3±0.084

——

——

5.4

6.8±0.152

——

——

5.8

2.5±0.084

——

——

6.2

——

——

——

6.6

——

5.3±0.130

3.6±0.130

7.0

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