DB64T1605-2019 牛病毒性腹泻粘膜病酶联免疫吸附试验操作规程.pdfVIP

ICS11.220

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DR64

宁夏回族自治区地方标准

DB64/T1605-2019

牛病毒性腹泻／粘膜病酶联免疫吸附试验操

作规程

2019-02-12发布2019-05-12实施

宁夏回族自治区市场监督管理厅发布

DB64/T1605一－2019

目IJ吕

本标准的编写格式符合GB/Tl.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的要求。

本标准由宁夏宁夏农林科学院提出。

本标准由宁夏回族自治区农业农村厅归口。

本标准由宁夏农林科学院动物科学研究所起草。

本标准主要起草人：康晓冬、李知新、王建东、高海慧、岳彩娟、吴韶儒、范春梅、王伟华、宣小

龙、李昕、张奎举、邵倩、高慧兰。

0864/T1605一一2019

牛病毒性腹泻／粘膜病酶联免疫吸附试验操作规程

1范围

本标准规定了牛病毒性腹泻酶联免疫吸附试验的诊断技术规范。

本标准适用于牛血清、血浆、全血、牛奶和耳部切口组织样本中牛病毒性腹泻病毒抗原／抗体的检

测，可用于该病的实验室检测、诊断和流行病学调查。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

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GB/T18637-2002牛病毒性腹泻／粘膜病诊断技术

SNIT1129-2015牛病毒性腹泻／粘膜病检疫技术规范

SNIT1999-2007牛病毒性腹泻－粘膜病抗原捕获酶联免疫吸附试验操作规程

3牛病毒性腹泻病毒抗原酶联免疫阪附试验

3.1材料准备

3.1.1工作液的稀释

首先将10倍浓缩的洗液置于18℃～26℃，混旋后确定析出的盐类全部溶解。将浓缩洗液用蒸馆水

或去离子水作1:10稀释，混匀备用。无菌条件下制备的洗涤液在2℃～8℃可保存1周。稀释用蒸馆水

应符合GB/T6682的要求。

3.1.2抗原检测试剂盒保存

病毒性腹泻病毒抗原检测试剂盒保存温度为2℃～8℃。试剂盒内应包括如下物品：BVDV(Erns)

特异性单克隆抗体包被的微量反应板：酶标抗体；阳性对照：阴性对照：耳部切口组织浸泡缓冲液：检

测溶液；10×浓缩洗液；TMB底物溶液；终止液。

3.1.3仪器与设备

抗原检测所需的仪器与设备有：

一一酶标仪，单波长为450run，双波长为450nm/650run;

一一振荡器：

一一高速台式离心机：

一一冰箱，2℃～8℃；

一－37℃恒温培养箱：

0864/T1605-2019

一一洗板机，8孔、12孔或96孔均可；

一－8道或12道移液器，容量在30µL~300µL;

一一单道移液器，容量在0.5µL~10µL、20µL~200µL;100µL~1000µL、1mL~10mL。

3.1.4检测样品

新鲜或冰冻的血清、血浆、全血都可用于检测。

耳部切口组织样品：取直径为2mm，...飞..

在采样管中孵育。加150µL~250