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食品微生物检验技术课程综述

大肠杆菌的检测（MPN计数法）

院系：食品科学与药学学院

班级：食科114

姓名:张花

学号:114031431

组长:张军玲

成员：张花

赵晶郁

朱娟娟

大肠杆菌Petrifilm测试片计数法

摘要

食品检测是反映食品加工、贮藏、运输、等环节的卫生与安全

状况的重要手段,而大肠菌群检测则是食品检测的重要指标均之一.根

据定义大肠菌群是在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和

碱性厌氧的革兰氏阴性芽胞杆菌.其主要检测意义在于反映食品卫生

状况并推测其在肠道致病菌的可能性。Petrifilm大肠菌群测试片是由

美国3M生产的一种预先制备好的VRB平板培养基系统，并添加了

TTC作为菌落指示剂便于菌落判读，而上层薄膜可以起到对大肠菌群

发酵产生的气体截留的作用。该方法目前已被多数权威机构认可，并

在国内很多实验室开展运用。

关键词大肠杆菌Petrifilm测试法

2

1设备和材料

1。1恒温培养箱:36±1℃。

1.2冰箱2～5℃。

1.3恒温水浴箱:44。5±0。2℃。

1.4天平:感量0。1g.

1.5均质器

1.6振荡器。

1.7无菌吸管：lmL（具0.01mL刻度）、10mL（具0。1mL刻度）或微

量移液器及吸头。

1.8无菌锥形瓶：容量500mL。

1。9玻璃珠:直径约5mm。

1.10pH计或pH比色管或精密pH试纸

1。11试管架.

2.培养基和试剂

2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤。

2.2EC肉汤.

2。3蛋白胨水.

2。4缓冲葡萄糖蛋白胨水（MP—VP实验用）。

2。5磷酸盐缓冲液。

2。6无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃

高压灭菌15min。

3

2。71mol/L氢氧化钠（NaOH）：称取40g氢氧化钠溶于1000ml蒸

馏水中。

2.81mol/L盐酸（HCI）：移取浓盐酸90ml,用蒸馏水稀释至1000ml。

3检验程序

4.样品稀释

4。1固体和半固体样品：以无菌操作将检样25mL样品，置盛有

225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内或其他稀释液的灭菌锥形瓶内

(瓶内予置适当数量的玻璃珠,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀

释液。固体检样最好用均质器,以8000—10000r/min的速度处理

1~2min,做成1:10的样品均匀稀释液）。

4.2液体样品:以无菌吸管吸取样品25ml置盛有225mL磷酸盐缓

冲液的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的玻璃珠）中，充分振摇，制

4

成1：10的样品匀液。

4。3样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/L

氢氧化钠（NaOH）或1mol/L盐酸（HCI)调节。

4.4用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL,沿管壁缓缓注入含有

9mL磷酸盐缓冲液的无菌试管内，振摇试管混匀,做成1:100的稀释

液.

4。5根据对样品污染状况的估计,按上条操作依次做10倍递增稀

释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。从制备样品匀液至样

品接种完毕，全程不得超过15min。

5检验

5。1接种和培养

选取