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总胡萝卜素的测定(比色法)
一、原理
样品通过石油醚—丙酮(1:0.5V/V)混合液萃取,使之与非类胡萝卜素成分分离,在
451nm波长下测定萃取溶液的消光度,可以计算出食品中总胡萝卜素的含量。二、材料、仪器与试剂
(一)材料:胡萝卜、菠菜、油菜等。
(二)仪器:可见分光光度计、分液漏斗(150mL)、容量瓶(50mL)、量筒(100mL)、三角瓶(100mL)、研钵、铁架台、漏斗、铁圈。
(三)试剂:石油醚、丙酮、无水硫酸钠、石英砂、饱和氯化钠溶液。三、操作步骤
(一)样品处理:称取5g已捣碎混匀的样品置研钵内,加石油醚、丙酮(1:0.5)混合溶液10mL,石英砂少量,研磨提取,然后将提取液过滤至100mL三角瓶中。如此反复提取残渣3~4次。并过滤,直到提取液无色,将几次滤液从100mL三角瓶移至150mL梨形分液漏斗中,并用水洗涤石油醚层,出现乳化时,加饱和NaCl溶液3~5mL,剧烈振荡,待液相分层后,弃去下层水相,重复2~3次,将石油醚层定量转移至50mL容量瓶中,用无水硫酸钠过滤,以石油醚定容,摇匀。置暗处供比色用。
(二)测定:用1cm比色皿以石油醚作空白,在451nm波长处测定消光度。四、计算
以β-胡萝卜素含量计:
E×V×100×1000×1000
总胡萝卜素(μg/100g)=
E1×W×100E×50×100×1000×1000
=
2500×W×100
E
= ×20000
W
式中:E——样品在451nm波长下消光值
E1——1%β-胡萝卜素石油醚溶液在451nm波长下的消光值,即2500V——样品中总胡萝卜素石油醚提取液定溶毫升数
W——样品重量(g)
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