CCAA团体标准草案编制说明-甲型肝炎病毒.docxVIP

CCAA团体标准草案编制说明 基本信息 标准草案名称 中文 水体中甲型肝炎病毒检测方法 实时荧光RT-PCR法 英文 A method for determination of hepatitis A virus in water ---real-time RT-PCR 项目类型 √制定 □修订 （被修订标准名称及编号：） 计划编号 2022TB037 起止时间 2022年 11月---2023 年 10月 标准起草单位 中华人民共和国丹东海关、庄河市检验检测认证技术服务中心、中国合格评定国家认可中心、本溪市动物疫病预防控制中心、拱北海关技术中心、北京美正生物科技有限公司、浙江诺威检测认证有限公司、国检测试控股集团辽宁有限公司。 起草组成员 麻丽丹、朱金艳、白庆华、王志强、姚丽锋、周傲白雪、刘磊、陶文靖、陆嘉诚、盛琳、崔亚丽、杨希国、李丽、刘石鑫。 项目调整情况 无 背景、目的和意义 背景 水体的安全问题目前已经受到了人们的广泛关注，肠道病毒的水源性爆发是一项重大的公共卫生问题，例如人们生活中的饮用水、食品生产加工用水、水产养殖用水、污水等，这些水如果受到病毒污染，则会给人们的健康带来极大危害。肠道病毒来源广，传播途径多样，其中甲肝病毒的环境适应能力强，能在自然环境水体中存活很长时间，是对人类健康影响较大的污染物，已经导致了多起大规模的疾病爆发，引起了人们的广泛关注。甲肝病毒是最为常见的监测项目之一，通常经过被粪便污染的水或者食物传播，也是国际标准中明确需要监测的项目。 由于环境样本中甲肝病毒含量非常低，对病毒的检测困难，需要一种高效、可靠的病毒富集和检测方法。目前，国际上主要的检验方法有细胞培养法、免疫学方法、PCR方法等，但我国目前没有水体中甲肝病毒检验的相关标准方法。此外，这些方法检测的前提是需要从水体中富集回收病毒，因此，对于生活和生产中的大体积水的富集回收是一个关键技术。 目的 本标准建立“水体中甲型肝炎病毒检测方法 实时荧光RT-PCR法”体系，包括采用阳离子膜富集小体积水和超滤方法及装置对大体积水富集回收操作，以及甲肝病毒实时荧光RT-PCR法。 意义 通过制定此项标准填补我国标准上的空白，为水体中甲肝病毒的富集和检测提供前沿、高效方法。 工作简况 标准主要起草人任务分工 麻丽丹、朱金艳、丁宁、刘磊、陶文靖、盛琳： 对方法涉及的仪器、耗材、试剂等要求给出明确规定； 对病毒富集及检测操作流程（浓缩、洗脱、核酸提取、检测等）给出明确规定； 病毒富集、RT-PCR反应涉及的参数给出明确规定；对实时荧光RT-PCR结果判读和分析给出明确规定； 起草标准文本。 王志强、姚丽锋、周傲白雪、陆嘉诚、崔亚丽、杨希国、李丽、刘石鑫：方法实验室内验证和重复性实验。 主要工作过程 1.分工情况 标准起草组织工作由中华人民共和国丹东海关牵头负责，主要工作为收集整理国内外相关标准和技术资料；制定方法验证方案、负责检测方法优化建立与验证、样品检验结果分析；组织标准起草及实验室方法可行性验证，撰写标准文本和编制说明。 2.起草阶段 2022.11-2023.10：方法验证和起草征求意见稿； 3.征求意见阶段 2023.11：征集意见和制定标准文本； 4.标准审定阶段 2023.12：标准评审和报送材料。 标准编制原则和确定标准主要内容的论据 标准编制原则 本标准为首次制定，以科学的实验数据为依据，经过科学研究而制定。本标准旨在利用实时荧光RT-PCR法实现水体中甲型肝炎病毒的快速定性检测。本标准不仅是SN/T 4784-2017《出口食品中诺如病毒和甲肝病毒检测方法 实时RT-PCR方法?》的有效补充，同时对其进行了改进。在简化水样病毒富集处理的同时，保证了测试的准确性与可重复性，能快速测定水体中的甲肝病毒，提供了一种准确快速的检测方法，具有广泛的适用性。同时，本方法在编制过程中引入第三方实验室对本标准所列方法进行验证和评价，具有先进性、科学性、合理性和可操作性。 确定标准主要内容的论据 标准主要内容包括两部分，一部分为水体中甲型肝炎病毒检测，需要验证方法的检出限和重复性；另外一部分需要验证CS1000plus水体自动采样富集一体机用于水体中MS2 过程控制病毒的浓缩富集回收效果，从而验证在水体样品检测甲型肝炎病毒中应用的适用性，包括MS2的标准曲线的制备，MS2添加到不同水体样品中的回收率。 1、方法的检出限 每份样本加入50μL甲型肝炎病毒质控品的稀释液,相当于550基因拷贝/500mL瓶装水样本,结果见下表1。 表1 水中甲型肝炎病毒的检出限 样品编号 甲型肝炎病毒加入量/500mL瓶装水样本 Ct值 结果判定 1 550 38.107 阳性 2 550 36.874 阳性 3 550 37.237 阳性 4